Corso per Tecnico di Cromatografia

Lezione 1 • Il modello della colonna cromatografica

Introduce i piatti teorici, l'equazione di van Deemter e le fonti di allargamento di banda. Gli studenti utilizzano questi modelli per prevedere e diagnosticare la prestazione della colonna.

Lezione 2 • Principi fondamentali di termodinamica

Tratta equilibri di ripartizione, coefficienti di distribuzione ed energia libera di Gibbs di trasferimento. Collega la termodinamica al comportamento pratico di ritenzione osservato in laboratorio.

Lezione 3 • Fondamenti di interpretazione del cromatogramma

Insegna l'identificazione dei picchi, il tempo di ritenzione e la quantificazione di base da un cromatogramma. Stabilisce il vocabolario utilizzato in tutto il corso.

Lezione 4 • Interazioni fase stazionaria e fase mobile

Esamina polarità, legame a idrogeno e forze di van der Waals che governano la ritenzione degli analiti. Fornisce le basi chimiche per la scelta delle fasi nei capitoli tecnici successivi.

Lezione 1 • Uso dei dispositivi di protezione individuale

Specifica la corretta selezione dei DPI per guanti, protezione oculare e rischi respiratori in cromatografia. Rafforza che la scelta dei DPI dipende dallo specifico agente chimico e dall'attività.

Lezione 2 • Fondamenti di buona pratica di laboratorio

Introduce i principi GLP: tracciabilità, integrità dei dati grezzi e documentazione controllata. Gli studenti comprendono come la GLP sia alla base dell'accettazione normativa dei risultati analitici.

Lezione 3 • Riconoscimento dei pericoli chimici

Tratta i pittogrammi GHS, le schede di sicurezza e le classi di pericolo comuni nei laboratori di cromatografia. Prepara gli studenti a valutare il rischio prima di maneggiare solventi e reagenti.

Lezione 4 • Ergonomia e ordine del laboratorio

Tratta l'organizzazione della postazione di lavoro, la prevenzione dei traumi da sforzo ripetuto e i protocolli di pulizia a fine giornata. Il buon ordine riduce direttamente la contaminazione e i tempi di fermo strumento.

Lezione 1 • Selezione della fase mobile per TLC

Insegna la regolazione della forza del solvente e la serie eluotropica per lo sviluppo della fase mobile in TLC. Gli studenti ottimizzano i valori Rf attraverso uno screening sistematico dei solventi.

Lezione 2 • Calcolo dell'Rf e interpretazione dei risultati

Insegna la misurazione dell'Rf, la notazione hRf e il confronto con standard di riferimento per l'identificazione. Gli studenti documentano e interpretano i risultati TLC in un formato conforme alla GLP.

Lezione 3 • Metodi di visualizzazione e rivelazione

Introduce luce UV, vapori di iodio e reagenti spray chimici per la visualizzazione delle macchie. La scelta del metodo di rivelazione dipende dai gruppi funzionali dell'analita.

Lezione 4 • Piastre TLC e fasi stazionarie

Descrive le piastre TLC in gel di silice, allumina e fase inversa e le loro applicazioni appropriate. La selezione della piastra determina direttamente la selettività della separazione.

Lezione 1 • Tecniche e modalità di iniezione

Tratta l'iniezione split, splitless e on-column con i casi d'uso appropriati per ciascuna modalità. La tecnica di iniezione influisce criticamente sulla forma del picco e sull'accuratezza quantitativa.

Lezione 2 • Architettura dello strumento GC

Mappa il percorso del flusso dal gas di trasporto attraverso iniettore, forno colonna e rivelatore. Comprendere la disposizione dello strumento è prerequisito per un funzionamento sicuro ed efficace.

Lezione 3 • Colonne GC e fasi stazionarie

Confronta colonne impaccate e capillari, fasi polari ed effetti dello spessore del film sulla separazione. La selezione della colonna determina la risoluzione e la velocità di analisi.

Lezione 4 • Strategie di programmazione della temperatura

Insegna le analisi isoterme rispetto a quelle a temperatura programmata e il loro effetto su risoluzione e tempo di analisi. Gli studenti progettano programmi di temperatura per separare miscele complesse in modo efficiente.

Lezione 5 • Sviluppo del metodo GC e risoluzione dei problemi

Guida l'ottimizzazione sistematica del flusso del gas di trasporto, della temperatura e dei parametri di iniezione. Gli studenti diagnosticano lo scodamento dei picchi, i picchi fantasma e la deriva della linea di base da cromatogrammi reali.

Lezione 1 • Fondamenti di HPLC in fase inversa

Tratta le fasi stazionarie C18 e C8, le fasi mobili acquoso-organiche e i meccanismi di ritenzione. La fase inversa è la modalità HPLC dominante che gli studenti incontreranno nella pratica.

Lezione 2 • Tecniche di eluizione a gradiente

Insegna la programmazione del gradiente, gli effetti del volume di dwell e i requisiti di riequilibrio. I metodi a gradiente risolvono campioni con ampio intervallo di polarità che le analisi isocratiche non possono gestire.

Lezione 3 • Componenti del sistema HPLC e percorso del flusso

Identifica pompe, degasatori, iniettori, colonne e rivelatori e traccia il flusso della fase mobile. La comprensione del sistema previene perdite, guasti di pressione e contaminazione.

Lezione 4 • Rivelazione UV-Vis e a serie di diodi

Spiega i principi dell'assorbanza UV, la selezione della lunghezza d'onda e la conferma spettrale con DAD. Le impostazioni di rivelazione influenzano direttamente la sensibilità e la valutazione della purezza del picco.

Lezione 5 • Risoluzione dei problemi e manutenzione HPLC

Affronta contropressione elevata, picchi fantasma, deriva del tempo di ritenzione e guasti delle guarnizioni della pompa. I programmi di manutenzione preventiva prolungano significativamente la durata della colonna e dello strumento.

Lezione 1 • Metodo dello standard interno

Spiega i criteri di selezione dello standard interno, il calcolo del fattore di risposta e la correzione per la variabilità di iniezione. I metodi IS migliorano la precisione quando si verificano perdite durante la preparazione del campione.

Lezione 2 • Incertezza di misura e refertazione

Introduce le fonti di incertezza, le regole di propagazione e l'espressione dei risultati con intervalli di confidenza. Una corretta refertazione dell'incertezza è richiesta dagli organismi di accreditamento e normativi.

Lezione 3 • Quantificazione con standard esterno

Insegna i metodi a standard esterno a punto singolo e multipunto con sequenze di iniezione a bracketing. Gli studenti comprendono quando gli effetti matrice limitano l'accuratezza dello standard esterno.

Lezione 4 • Costruzione della curva di calibrazione

Tratta la calibrazione multipunto, la regressione lineare e la valutazione dell'R² per i dati cromatografici. Una curva di calibrazione valida è il fondamento di ogni risultato quantitativo.

Lezione 1 • Documentazione e rapporti di validazione

Struttura un rapporto di validazione completo includente protocollo, dati grezzi, riepiloghi statistici e conclusioni. La documentazione deve soddisfare sia le SOP interne che la revisione normativa esterna.

Lezione 2 • Test di robustezza e ruggedness

Applica i disegni di Plackett-Burman per identificare i parametri del metodo più sensibili a piccoli cambiamenti. I metodi robusti funzionano in modo affidabile con operatori, strumenti e lotti di reagenti diversi.

Lezione 3 • Limite di rivelazione e quantificazione

Tratta gli approcci basati su segnale/rumore, bianco e curva di calibrazione per la determinazione di LOD e LOQ. Gli studenti selezionano l'approccio appropriato per la loro matrice e il contesto normativo.

Lezione 4 • Panoramica dei parametri di validazione

Definisce specificità, linearità, accuratezza, precisione, LOD, LOQ e robustezza come parametri fondamentali di validazione. Ogni parametro risponde a una domanda specifica sull'idoneità allo scopo del metodo.

Lezione 5 • Studi di accuratezza e precisione

Progetta esperimenti di recupero con aggiunta e studi di precisione inter-giorno per dimostrare l'accuratezza del metodo. Strumenti statistici tra cui RSD e t-test valutano se i risultati soddisfano i criteri di accettazione.

Lezione 1 • Cromatografia ionica per analiti ionici

Tratta la rivelazione a conducibilità soppressa, le colonne a scambio anionico e cationico e la generazione dell'eluente. La CI è la tecnica principale per ioni inorganici e piccoli acidi organici.

Lezione 2 • Funzionamento GC-MS e interpretazione spettrale

Insegna la progettazione dell'interfaccia GC-MS, la ricerca in libreria e l'interpretazione dei modelli di frammentazione. Gli studenti confermano l'identità del composto e rilevano le interferenze co-eluenti utilizzando gli spettri di massa.

Lezione 3 • Panoramica della cromatografia a fluido supercritico

Introduce le fasi mobili a base di CO2, l'aggiunta di modificatore e i vantaggi della SFC per analiti chirali e lipofili. La SFC unisce la velocità della GC con la versatilità dell'HPLC per classi di composti specifici.

Lezione 4 • Principi LC-MS e LC-MS/MS

Spiega le interfacce ESI e APCI, la soppressione di matrice e le transizioni MRM per la quantificazione mirata. La LC-MS/MS è il gold standard per l'analisi a livello di tracce in matrici biologiche complesse.