Curso de Centrifugación

Lección 1 • Principios de Sedimentación

Explica la ley de Stokes, los coeficientes de sedimentación y el comportamiento de las partículas en un campo centrífugo. Vincula el tamaño de partícula, la densidad y la viscosidad con la eficiencia de separación.

Lección 2 • Física de la Fuerza Centrífuga

Cubre la fuerza centrífuga y centrípeta, la velocidad angular y la fuerza centrífuga relativa (RCF). Establece las leyes físicas que rigen toda operación de centrifugación.

Lección 3 • Relaciones de Flotabilidad y Densidad

Introduce la densidad de flotación, la densidad efectiva de partícula y la flotación. Explica cómo las diferencias de densidad entre partículas y medio impulsan la separación.

Lección 1 • Sistemas de Temperatura y Vacío

Describe las unidades de refrigeración, sensores de temperatura y cámaras de vacío en ultracentrífugas. Explica cómo el control térmico preserva las muestras biológicas y químicas.

Lección 2 • Diseño y Selección de Rotores

Cubre rotores de ángulo fijo, basculantes, verticales y casi verticales. Los estudiantes aprenden cómo la geometría del rotor afecta la trayectoria de sedimentación y el tiempo de corrida.

Lección 3 • Tubos, Frascos y Adaptadores

Revisa los materiales de los tubos de centrífuga, rangos de volumen y tipos de cierre. Conecta la selección del recipiente con la compatibilidad química y la tolerancia máxima de RCF.

Lección 4 • Sistemas de Impulsión y Control de Velocidad

Explica los tipos de motores, impulsiones sin escobillas y la regulación electrónica de velocidad. Demuestra cómo los perfiles de aceleración y desaceleración afectan la integridad de la muestra.

Lección 1 • Marcos de Cumplimiento Normativo

Revisa las normas de salud ocupacional, seguridad de laboratorio y certificación de equipos aplicables a las centrífugas. Prepara a los estudiantes para auditar el cumplimiento en sus instalaciones.

Lección 2 • Bioseguridad y Niveles de Contención

Aplica los requisitos del nivel de bioseguridad al uso de centrífugas con agentes infecciosos. Cubre rotores sellados, cabinas de bioseguridad y procedimientos de descontaminación.

Lección 3 • Equipo de Protección Personal

Especifica la selección de EPP para diferentes escenarios de centrifugación, incluidos materiales infecciosos y peligrosos. Vincula la elección del EPP con el nivel de peligro y la guía regulatoria.

Lección 4 • Procedimientos de Respuesta a Emergencias

Define respuestas paso a paso ante falla del rotor, rotura de tubos y derrames peligrosos dentro de la centrífuga. Reduce el daño mediante una acción sistemática y practicada.

Lección 1 • Procedimientos de Carga y Descarga

Detalla las secuencias seguras de carga del rotor, el torque de la tapa y la descarga posterior a la corrida para preservar sedimentos y gradientes. La disciplina procedimental previene la pérdida de muestra y la contaminación.

Lección 2 • Equilibrio Preciso de Rotores

Enseña métodos de equilibrio gravimétrico y volumétrico para todos los tipos de rotor. El desbalance es la causa principal de estrés del rotor y daño del instrumento.

Lección 3 • Llenado de Tubos y Control de Volumen

Especifica los volúmenes de llenado para diferentes tipos de tubos y rotores para prevenir colapsos o desbordamientos. El llenado correcto es esencial tanto para la seguridad como para la calidad de la separación.

Lección 4 • Selección de Amortiguador y Medio

Explica cómo la composición del amortiguador, el pH, la fuerza iónica y la osmolaridad afectan la integridad de las partículas. Guía a los estudiantes en la elección de medios que preserven la función de la muestra.

Lección 1 • Flujos de Trabajo de Fraccionamiento Subcelular

Presenta protocolos estándar para aislar núcleos, mitocondrias, microsomas y citosol. Los estudiantes relacionan cada fracción con su origen biológico y marcador esperado.

Lección 2 • Principios de la Sedimentación Diferencial

Explica la lógica de sedimentación secuencial, la composición del sedimento y el arrastre del sobrenadante. Establece la base conceptual para todos los flujos de trabajo de fraccionamiento diferencial.

Lección 3 • Optimización de Parámetros de Velocidad y Tiempo

Guía la selección de parámetros utilizando coeficientes de sedimentación y cálculos del factor k. La optimización reduce el tiempo de corrida manteniendo la pureza de la fracción.

Lección 1 • Centrifugación por Velocidad Zonal

Aplica la sedimentación dependiente del tiempo para separar partículas por tamaño dentro de un gradiente estabilizador. Los estudiantes calculan las condiciones de corrida para posicionar las bandas en las ubicaciones deseadas.

Lección 2 • Técnicas de Formación de Gradientes

Cubre métodos de preparación de gradientes escalonados, lineales y continuos, incluidos los formadores de gradiente. La forma del gradiente controla directamente la resolución y el tiempo de separación.

Lección 3 • Fraccionamiento y Análisis de Gradientes

Describe los métodos de desplazamiento ascendente, punción de tubo y colector de fracciones para la recolección del gradiente. El análisis de fracciones confirma la identidad y pureza de la banda.

Lección 4 • Centrifugación Isopícnica

Utiliza el bandeo de equilibrio a la densidad de flotación para separar partículas independientemente del tamaño. Cubre gradientes de equilibrio de CsCl para aislamiento de ADN y ARN.

Lección 1 • Fraccionamiento de Lipoproteínas y Membranas

Utiliza ultracentrifugación secuencial y ajuste de densidad con KBr para aislar clases de lipoproteínas. El aislamiento de fracciones de membrana apoya la proteómica y el análisis de lípidos.

Lección 2 • Fundamentos de la Operación de la Ultracentrífuga

Cubre el arranque del sistema de vacío, la instalación del rotor y la programación de parámetros de corrida para ultracentrífugas. La operación correcta previene fallas catastróficas del rotor a velocidades extremas.

Lección 3 • Aislamiento de Exosomas y Vesículas

Presenta protocolos de ultracentrifugación diferencial y cojín para el aislamiento de vesículas extracelulares. Los estudiantes logran sedimentos de exosomas reproducibles a partir de fluidos biológicos.

Lección 4 • Purificación de Virus y Vectores Virales

Aplica gradientes escalonados de yodixanol y bandeo con CsCl para purificar partículas virales para investigación y terapia génica. Los requisitos de título y pureza impulsan el diseño del protocolo.

Lección 1 • Cuidado e Inspección del Rotor

Cubre la limpieza del rotor, detección de corrosión, identificación de grietas por estrés y criterios de retiro. La integridad del rotor es el factor de seguridad más crítico en la centrifugación.

Lección 2 • Programas de Mantenimiento Preventivo

Define las tareas de mantenimiento diarias, semanales, mensuales y anuales para rotores, cámaras y sistemas de impulsión. El mantenimiento programado extiende la vida útil del instrumento y previene tiempos de inactividad no planificados.

Lección 3 • Calibración y Verificación de Desempeño

Describe los procedimientos de calibración de velocidad, temperatura y temporizador utilizando estándares trazables. El desempeño verificado asegura la reproducibilidad de los datos y el cumplimiento normativo.

Lección 4 • Garantía de Calidad y Documentación

Establece prácticas de cuaderno de bitácora, informe de desviaciones y protocolos de cualificación de instrumentos. La documentación sólida respalda las auditorías, la reproducibilidad y la mejora continua.