Curso de cromatografía líquida y de gases

Lección 1 • Resolución, selectividad y eficiencia

Define la resolución matemáticamente y la descompone en eficiencia, selectividad y factor de retención. Proporciona herramientas para diagnosticar y mejorar la calidad de la separación.

Lección 2 • Ensanchamiento de banda y teoría de platos

Introduce los platos teóricos y la ecuación de van Deemter para cuantificar la eficiencia de la columna. Conecta el ancho de pico con la optimización práctica de la columna y el flujo.

Lección 3 • Base termodinámica de la retención

Explica los coeficientes de partición, adsorción y distribución que rigen la retención del analito. Vincula los cambios de energía libre de Gibbs con el comportamiento cromatográfico observado.

Lección 4 • Interacciones de fase estacionaria y móvil

Revisa las fuerzas de polaridad, enlace de hidrógeno y dispersión que impulsan la partición del analito. Establece los conceptos de fuerza del solvente y selectividad utilizados a lo largo del curso.

Lección 1 • Arquitectura del cromatógrafo de gases

Describe el suministro de gas portador, controladores de flujo, inyectores, horno, columna y detector como un sistema integrado. Enfatiza cómo cada componente afecta la calidad de la separación.

Lección 2 • Adquisición de datos y control del sistema

Cubre la conversión analógico-digital, sistemas de datos cromatográficos y software de control de instrumentos. Establece las prácticas de integridad de datos requeridas para entornos regulados.

Lección 3 • Arquitectura del cromatógrafo de líquidos

Mapea el depósito de solvente, desgasificador, bomba, inyector, compartimento de columna y detector en un sistema HPLC. Destaca las clasificaciones de presión y la integridad del camino de flujo.

Lección 4 • Tecnología de bombas HPLC

Explica los diseños de bombas de pistón alternativo, jeringa y cuaternarias y su exactitud de flujo. Cubre métodos de amortiguación de pulsos y formación de gradientes.

Lección 1 • Cuidado, acondicionamiento y solución de problemas de columnas

Detalla protocolos de acondicionamiento, almacenamiento y modos de falla comunes como contaminación y rotura. Permite a los estudiantes extender la vida útil de la columna y diagnosticar la pérdida de rendimiento.

Lección 2 • Columnas empacadas y sus aplicaciones

Cubre materiales de soporte, cargas líquidas y aplicaciones donde las columnas empacadas superan a las columnas capilares. Aborda el análisis de gases y la GC a escala preparativa.

Lección 3 • Diseño y geometría de columnas capilares

Explica la construcción de capilares de sílice fundida, desactivación y parámetros dimensionales. Vincula el diámetro interno, espesor de película y longitud con la eficiencia y capacidad.

Lección 4 • Estrategia de selección de columnas

Proporciona un flujo de trabajo sistemático para relacionar la polaridad, dimensiones y rango de temperatura de la columna con los analitos objetivo. Integra datos del índice de retención de Kovats en la selección.

Lección 1 • Operación del detector de conductividad térmica

Describe el diseño del puente de Wheatstone y los principios de conductividad térmica del gas portador. Posiciona al TCD para la detección universal de gases inorgánicos y permanentes.

Lección 2 • Métricas de rendimiento y selección de detectores

Define sensibilidad, selectividad, linealidad, cantidad mínima detectable y rango dinámico. Guía la elección del detector según la matriz del analito y los límites de detección regulatorios.

Lección 3 • Detectores selectivos: ECD, NPD y FPD

Cubre los detectores de captura de electrones, nitrógeno-fósforo y fotométrico de llama para clases de analitos específicos. Aborda el manejo de fuentes radiactivas y la calibración específica del detector.

Lección 4 • Detección por espectrometría de masas en GC

Introduce los analizadores de masas cuadrupolar, trampa iónica y tiempo de vuelo acoplados a GC. Cubre modos de adquisición scan, SIM y MS/MS para identificación y cuantificación.

Lección 1 • Intercambio iónico y cromatografía iónica

Describe resinas de intercambio iónico fuertes y débiles y detección por conductividad suprimida para analitos iónicos. Cubre la selección de eluyentes y la operación del supresor.

Lección 2 • Exploración y optimización de fase móvil

Aplica cuadrículas de exploración sistemáticas y optimización de triángulos para identificar la composición óptima de la fase móvil. Integra pH, tipo de solución amortiguadora y modificador orgánico en un flujo de trabajo estructurado.

Lección 3 • Separaciones en fase normal e HILIC

Contrasta la adsorción en fase normal con la cromatografía de interacción hidrofílica para analitos polares. Aborda la formación de la capa de agua y el contenido de agua en la fase móvil en HILIC.

Lección 4 • Tecnología de partículas y formatos de columna

Compara partículas totalmente porosas, superficialmente porosas y sub-2 micras para eficiencia y contrapresión. Introduce los formatos de columna monolítica y de núcleo fundido.

Lección 1 • Tecnologías de interfase LC-MS

Explica la ionización por electrospray, ionización química a presión atmosférica e interfases APPI. Cubre la supresión iónica, efectos de matriz y optimización de parámetros de interfase.

Lección 2 • Análisis cuantitativo LC-MS/MS

Aplica monitoreo de reacciones múltiples y adquisición independiente de datos para cuantificación de trazas en matrices complejas. Cubre la selección de estándar interno y calibración ajustada a matriz.

Lección 3 • Índice de refracción y dispersión de luz evaporativa

Describe RI y ELSD como detectores universales para analitos que no absorben UV, como azúcares y lípidos. Aborda la incompatibilidad con gradiente y la optimización de nebulización.

Lección 4 • Detectores de fluorescencia y electroquímicos

Explica la detección por fluorescencia de excitación-emisión y la detección electroquímica amperométrica para aplicaciones de alta sensibilidad. Cubre estrategias de derivatización para ampliar la aplicabilidad del detector.

Lección 1 • Diseño de experimentos en cromatografía

Aplica diseños factoriales y de superficie de respuesta para optimizar múltiples parámetros del método simultáneamente. Interpreta gráficos de interacción y mapas de contorno para localizar condiciones de operación robustas.

Lección 2 • Exploración y cribado sistemáticos

Aplica arreglos de exploración de columnas y fases móviles para identificar rápidamente condiciones de separación prometedoras. Usa corridas de exploración en gradiente para estimar el espacio de retención y selectividad.

Lección 3 • Definición de requisitos y metas del método

Establece la lista de analitos, complejidad de la matriz, límites de detección y metas de rendimiento antes de la selección de columna o fase móvil. Traduce las metas analíticas en criterios medibles de rendimiento del método.

Lección 4 • Optimización de temperatura y flujo

Cuantifica los efectos de la temperatura sobre la viscosidad, difusión y selectividad tanto en LC como en GC. Aplica la optimización de van Deemter para establecer flujos de gas portador o fase móvil.

Lección 1 • Aptitud del sistema y QC continuo

Establece criterios de aptitud del sistema para número de platos, factor de coleo, resolución y RSD antes de cada corrida analítica. Integra gráficos de control y muestras QC para monitoreo continuo del rendimiento.

Lección 2 • Estrategias de calibración y ajuste de curvas

Compara la calibración con estándar externo, estándar interno y adición estándar para diferentes tipos de matriz. Evalúa modelos de regresión lineal, cuadrática y ponderada para el mejor ajuste.

Lección 3 • Parámetros de validación y criterios de aceptación

Define especificidad, linealidad, exactitud, precisión, LOD, LOQ, rango y robustez como parámetros centrales de validación. Vincula cada parámetro con su criterio de aceptación regulatorio.

Lección 4 • Pruebas de robustez y resistencia

Aplica el cribado de Plackett-Burman para identificar los parámetros del método más sensibles a pequeños cambios deliberados. Distingue robustez de resistencia y documenta los rangos de operación aceptables.