Cours de centrifugation

Leçon 1 • Principes de sédimentation

Explique la loi de Stokes, les coefficients de sédimentation et le comportement des particules dans un champ centrifuge. Relie la taille, la densité et la viscosité des particules à l'efficacité de séparation.

Leçon 2 • Physique de la force centrifuge

Couvre la force centrifuge et centripète, la vitesse angulaire et la force centrifuge relative (RCF). Établit les lois physiques qui régissent tout fonctionnement de centrifugeuse.

Leçon 3 • Relations entre flottabilité et densité

Présente la densité de flottaison, la densité effective des particules et la flottation. Explique comment les différences de densité entre les particules et le milieu entraînent la séparation.

Leçon 1 • Systèmes de température et de vide

Décrit les unités de réfrigération, les capteurs de température et les chambres à vide dans les ultracentrifugeuses. Explique comment le contrôle thermique préserve les prélèvements biologiques et chimiques.

Leçon 2 • Conception et sélection du rotor

Couvre les rotors à angle fixe, à godet oscillant, verticaux et quasi-verticaux. Les apprenants découvrent comment la géométrie du rotor affecte le trajet de sédimentation et la durée de la série.

Leçon 3 • Tubes, flacons et adaptateurs

Passe en revue les matériaux des tubes de centrifugeuse, les plages de volume et les types de fermeture. Relie le choix du récipient à la compatibilité chimique et à la tolérance maximale de RCF.

Leçon 4 • Systèmes d'entraînement et contrôle de la vitesse

Explique les types de moteurs, les entraînements sans balais et la régulation électronique de la vitesse. Montre comment les profils d'accélération et de décélération affectent l'intégrité du prélèvement.

Leçon 1 • Cadres de conformité réglementaire

Passe en revue les normes de santé au travail, de sécurité en laboratoire et de certification des équipements applicables aux centrifugeuses. Prépare les apprenants à auditer la conformité dans leurs installations.

Leçon 2 • Biosécurité et niveaux de confinement

Applique les exigences des niveaux de biosécurité à l'utilisation de la centrifugeuse avec des agents infectieux. Couvre les rotors scellés, les enceintes de sécurité biologique et les procédures de décontamination.

Leçon 3 • Équipement de protection individuelle

Spécifie la sélection des EPI pour différents scénarios de centrifugeuse, y compris les matières infectieuses et dangereuses. Relie le choix de l'EPI au niveau de danger et aux directives réglementaires.

Leçon 4 • Procédures d'intervention d'urgence

Définit des réponses étape par étape à la défaillance du rotor, à la casse des tubes et aux déversements dangereux à l'intérieur de la centrifugeuse. Réduit les dommages grâce à une action systématique et pratiquée.

Leçon 1 • Procédures de chargement et de déchargement

Détaille les séquences sécuritaires de chargement du rotor, le couple du couvercle et le déchargement après la série pour préserver les culots et les gradients. La discipline procédurale évite la perte de prélèvement et la contamination.

Leçon 2 • Équilibrage précis des rotors

Enseigne les méthodes d'équilibrage gravimétrique et volumétrique pour tous les types de rotors. Le déséquilibre est la principale cause de contrainte du rotor et de dommages à l'instrument.

Leçon 3 • Remplissage des tubes et contrôle du volume

Spécifie les volumes de remplissage pour différents types de tubes et de rotors afin d'éviter l'affaissement ou le débordement. Un remplissage correct est essentiel à la fois pour la sécurité et la qualité de la séparation.

Leçon 4 • Sélection du tampon et du milieu

Explique comment la composition du tampon, le pH, la force ionique et l'osmolarité affectent l'intégrité des particules. Guide les apprenants dans le choix de milieux qui préservent la fonction du prélèvement.

Leçon 1 • Flux de travail de fractionnement subcellulaire

Présente des protocoles standard pour l'isolement des noyaux, des mitochondries, des microsomes et du cytosol. Les apprenants associent chaque fraction à son origine biologique et à son marqueur attendu.

Leçon 2 • Principes de la sédimentation différentielle

Explique la logique de sédimentation séquentielle, la composition du culot et l'entraînement du surnageant. Établit la base conceptuelle pour tous les flux de travail de fractionnement différentiel.

Leçon 3 • Optimisation des paramètres de vitesse et de temps

Guide la sélection des paramètres à l'aide des coefficients de sédimentation et des calculs du facteur k. L'optimisation réduit le temps de la série tout en maintenant la pureté de la fraction.

Leçon 1 • Centrifugation en zone de vitesse

Applique la sédimentation dépendante du temps pour séparer les particules par taille dans un gradient stabilisant. Les apprenants calculent les conditions de la série pour positionner les bandes aux endroits souhaités.

Leçon 2 • Techniques de formation du gradient

Couvre les méthodes de préparation de gradient par étapes, linéaire et continu, y compris les générateurs de gradient. La forme du gradient contrôle directement la résolution et le temps de séparation.

Leçon 3 • Fractionnement et analyse du gradient

Décrit les méthodes de déplacement ascendant, de ponction du tube et de collecteur de fractions pour la récolte du gradient. L'analyse des fractions confirme l'identité et la pureté des bandes.

Leçon 4 • Centrifugation isopycnique

Utilise l'équilibre à la densité de flottaison pour séparer les particules indépendamment de leur taille. Couvre les gradients d'équilibre au CsCl pour l'isolement de l'ADN et de l'ARN.

Leçon 1 • Fractionnement des lipoprotéines et des membranes

Utilise l'ultracentrifugation séquentielle et l'ajustement de la densité par KBr pour isoler les classes de lipoprotéines. L'isolement des fractions membranaires soutient la protéomique et l'analyse lipidique.

Leçon 2 • Bases essentielles du fonctionnement de l'ultracentrifugeuse

Couvre le démarrage du système de vide, l'installation du rotor et la programmation des paramètres de la série pour les ultracentrifugeuses. Un fonctionnement correct évite toute défaillance catastrophique du rotor à des vitesses extrêmes.

Leçon 3 • Isolement des exosomes et des vésicules

Présente des protocoles d'ultracentrifugation différentielle et de coussin pour l'isolement des vésicules extracellulaires. Les apprenants obtiennent des culots d'exosomes reproductibles à partir de liquides biologiques.

Leçon 4 • Purification des virus et des vecteurs viraux

Applique les gradients par étapes d'iodixanol et le banding au CsCl pour purifier les particules virales destinées à la recherche et à la thérapie génique. Les exigences de titre et de pureté déterminent la conception du protocole.

Leçon 1 • Entretien et inspection du rotor

Couvre le nettoyage du rotor, la détection de la corrosion, l'identification des fissures de contrainte et les critères de mise au rebut. L'intégrité du rotor est le facteur de sécurité le plus critique dans la centrifugation.

Leçon 2 • Calendriers de maintenance préventive

Définit les tâches de maintenance quotidiennes, hebdomadaires, mensuelles et annuelles pour les rotors, les chambres et les systèmes d'entraînement. La maintenance programmée prolonge la durée de vie de l'instrument et évite les temps d'arrêt imprévus.

Leçon 3 • Étalonnage et vérification des performances

Décrit les procédures d'étalonnage de la vitesse, de la température et de la minuterie à l'aide d'étalons traçables. Des performances vérifiées garantissent la reproductibilité des données et la conformité réglementaire.

Leçon 4 • Assurance qualité et documentation

Établit les pratiques de tenue du cahier de bord, le signalement des écarts et les protocoles de qualification de l'instrument. Une documentation solide soutient les audits, la reproductibilité et l'amélioration continue.