Cours de chromatographie d'exclusion stérique

Leçon 1 • Principes de la séparation chromatographique

Couvre les interactions phase stationnaire/phase mobile et les fondamentaux de l'élargissement de bande. Établit le vocabulaire utilisé tout au long du cours.

Leçon 2 • Base physique de l'exclusion stérique

Explique l'exclusion stérique et la diffusion dans les pores comme mécanisme de séparation unique. Relie la géométrie des pores à la discrimination par taille moléculaire.

Leçon 3 • Terminologie et paramètres clés de la SEC

Définit le volume mort, le volume d'élution et le coefficient de distribution Kd. Fournit le langage quantitatif nécessaire pour tous les chapitres suivants.

Leçon 1 • Entretien et durée de vie des colonnes

Couvre le stockage, la régénération et le suivi des performances pour maximiser la durée de vie des colonnes. Impacte directement la reproductibilité des données et l'efficacité des coûts.

Leçon 2 • Taille des pores et plage de fractionnement

Explique comment la taille nominale des pores détermine la fenêtre de fractionnement du poids moléculaire. Guide la sélection des colonnes pour les protéines, les polymères et les petites molécules.

Leçon 3 • Chimies des particules poreuses

Passe en revue les supports en silice, dextrane réticulé, agarose et polymères synthétiques. Relie la chimie à la compatibilité chimique et à la plage de fonctionnement.

Leçon 1 • Préparation des échantillons pour la SEC

Couvre la filtration, l'échange de tampon et les étapes de concentration avant l'injection. Prévient la contamination de la colonne et garantit des données précises de poids moléculaire.

Leçon 2 • Optimisation du débit et de la pression

Relie le débit à la résolution via l'équation de van Deemter adaptée à la SEC. Équilibre le temps d'analyse avec l'efficacité des pics.

Leçon 3 • Effets de la température sur la SEC

Décrit comment la température modifie la viscosité, la diffusion et les interactions secondaires. Guide la sélection de la température pour des séparations reproductibles.

Leçon 4 • Principes de composition de la phase mobile

Explique comment la force ionique, le pH et les modificateurs organiques suppriment les interactions non spécifiques. Établit les critères pour choisir les solvants SEC aqueux vs organiques.

Leçon 1 • Détection par absorbance UV-Vis

Explique la sélection de longueur d'onde, la linéarité du détecteur et la stabilité de la ligne de base pour la détection UV. Couvre la détection des protéines à 280 nm et la détection des acides nucléiques à 260 nm.

Leçon 2 • Architectures des systèmes HPLC et FPLC

Compare les plateformes de chromatographie liquide haute et basse pression utilisées pour la SEC. Guide la sélection de l'instrument en fonction de la pression, de l'échelle et du type d'échantillon.

Leçon 3 • Pompes, injecteurs et tubes

Détaille les types de pompes, le fonctionnement de la vanne d'injection et le volume mort des tubes. Minimise l'élargissement de bande extra-colonne pour des résultats précis.

Leçon 4 • Couplage viscosimétrie et spectrométrie de masse

Couvre la viscosimétrie en ligne pour la viscosité intrinsèque et le couplage SEC-MS pour la confirmation d'identité. Élargit les informations analytiques à partir d'une seule série SEC.

Leçon 1 • Moyennes de poids moléculaire et dispersité

Calculez Mn, Mw, Mz et la dispersité Đ à partir des données chromatographiques. Reliez les statistiques de distribution aux propriétés des matériaux et à la qualité du produit.

Leçon 2 • Étalonnage relatif avec des étalons

Utilisez des étalons à distribution étroite pour construire une courbe log MW vs volume d'élution. Établissez l'approche d'étalonnage la plus courante dans l'analyse des polymères et des protéines.

Leçon 3 • Masse moléculaire absolue avec MALS

Dérivez le MW absolu directement à partir de la diffusion de la lumière sans étalons d'étalonnage. Éliminez le biais de la chimie de la colonne pour les macromolécules complexes.

Leçon 4 • Validation des méthodes d'étalonnage

Appliquez les critères de justesse, fidélité, linéarité et plage à la validation de l'étalonnage. Garantissez l'intégrité des données pour les environnements réglementés et de recherche.

Leçon 1 • Optimisation du volume d'injection et de la charge d'échantillon

Déterminez le volume d'injection et la charge massique maximum avant que la résolution ne se dégrade. Empêchez les artefacts de surcharge en SEC analytique et préparative.

Leçon 2 • Définition des objectifs et exigences de la méthode

Traduisez les objectifs analytiques en critères de performance de méthode mesurables. Alignez les choix de colonne, de phase mobile et de détecteur avec l'utilisation prévue.

Leçon 3 • Stratégies d'amélioration de la résolution

Appliquez le couplage de colonnes, l'ajustement du débit et le réglage de la température pour améliorer la résolution. Fournissez des outils pratiques pour les séparations difficiles.

Leçon 4 • Tests de robustesse et de rugosité de la méthode

Évaluez la sensibilité de la méthode à de petits changements délibérés dans les paramètres clés. Identifiez les paramètres critiques et définissez les plages de fonctionnement acceptables.

Leçon 1 • Analyse de l'agrégation des protéines

Utilisez la SEC pour quantifier la teneur en monomères, dimères et agrégats d'ordre supérieur dans les échantillons de protéines. Soutenez directement l'évaluation de la qualité de la substance médicamenteuse.

Leçon 2 • Études de formulation et de stabilité

Surveillez l'agrégation et la fragmentation lors d'études de stabilité accélérée et en temps réel. Reliez les données SEC aux décisions de formulation et aux prédictions de durée de conservation.

Leçon 3 • Analyse des acides nucléiques et des oligonucléotides

Adaptez les conditions SEC pour le profilage de taille de l'ADN, de l'ARN et des oligonucléotides. Abordez les exigences uniques de phase mobile et de colonne pour les acides nucléiques.

Leçon 4 • Caractérisation des anticorps monoclonaux

Appliquez la SEC pour évaluer les variants de taille des mAb, les fragments et l'intégrité des conjugués. Couvrez les conditions de méthode spécifiques aux IgG et aux conjugués anticorps-médicament.

Leçon 1 • Rédaction de rapports techniques pour la SEC

Structurez les rapports SEC avec les sections méthodes, résultats, discussion et conclusions. Communiquez clairement les résultats aux parties prenantes scientifiques et non scientifiques.

Leçon 2 • Intégrité des données et enregistrements électroniques

Applique les principes de piste d'audit, de contrôle d'accès et de revue des données aux systèmes logiciels SEC. Répond aux attentes des cadres d'intégrité des données dans les industries réglementées.

Leçon 3 • Interprétation des chromatogrammes et intégration des pics

Applique les algorithmes de correction de ligne de base, de détection des pics et d'intégration aux chromatogrammes SEC. Garantit des calculs précis de pourcentage de surface et de poids moléculaire.

Leçon 4 • Validation de méthode pour les environnements réglementés

Exécute les paramètres de validation incluant la spécificité, la linéarité, la justesse et la fidélité. Prépare la documentation pour la soumission réglementaire et la préparation aux audits.