Cours de chromatographie

Leçon 1 • Les composants du système chromatographique

Identifie la phase stationnaire, la phase mobile, l'injecteur, la colonne et le détecteur comme les cinq composants essentiels. Explique comment chaque composant influence la qualité de la séparation.

Leçon 2 • Historique et portée de la chromatographie

Retrace la chromatographie depuis les travaux de Tswett sur les pigments végétaux jusqu'aux techniques couplées modernes. Contextualise pourquoi la science de la séparation est centrale en chimie analytique.

Leçon 3 • Élargissement des bandes et théorie des plateaux

Explique les plateaux théoriques, la HETP et l'équation de van Deemter comme métriques d'efficacité. Relie chaque terme d'élargissement aux variables opératoires pratiques.

Leçon 4 • Concepts de rétention et de sélectivité

Introduit le temps de rétention, le facteur de rétention et le facteur de sélectivité comme descripteurs quantitatifs. Montre comment l'ajustement de la chimie de la phase modifie la sélectivité.

Leçon 1 • Préparation des plaques CCM et dépôt

Couvre la sélection des plaques commerciales, la préparation des échantillons et la technique de dépôt correcte. Un dépôt correct détermine directement la qualité des taches et la reproductibilité des Rf.

Leçon 2 • Principes de la chromatographie planaire

Définit la migration de la phase mobile par capillarité sur des phases stationnaires planes. Distingue la CCM de la chromatographie sur papier par le sorbant et le mécanisme.

Leçon 3 • Sélection de la phase mobile pour la CCM

Applique la série éluotropique et l'appariement de polarité pour choisir des systèmes de solvants efficaces. L'optimisation systématique du solvant réduit le temps de développement par essai-erreur.

Leçon 4 • Techniques de CCM haute performance

Introduit les plaques HPTLC, le dépôt automatisé et le balayage densitométrique pour le travail quantitatif. La HPTLC fait le pont entre la CCM qualitative et les méthodes quantitatives instrumentales.

Leçon 1 • Détecteurs GC et leur sélectivité

Compare les détecteurs FID, TCD, ECD, NPD et FPD par sensibilité, sélectivité et linéarité. Le choix du détecteur est adapté à la classe d'analyte et aux limites de détection requises.

Leçon 2 • Colonnes GC et phases stationnaires

Classe les colonnes remplies et capillaires par polarité, épaisseur de film et diamètre interne. La sélection de la colonne détermine la sélectivité et constitue la principale variable de développement de méthode.

Leçon 3 • Techniques d'injection en GC

Compare les modes d'injection split, splitless, on-column et PTV pour différents types d'échantillons. La sélection du mode d'injection contrôle la discrimination, les artéfacts de discrimination et les limites de détection.

Leçon 4 • Programmation de température en GC

Explique les essais isothermes vs. programmés en température et leur effet sur la résolution et la durée d'analyse. Les programmes de température optimisés séparent efficacement les mélanges à large intervalle d'ébullition.

Leçon 1 • Chromatographie par échange d'ions et chromatographie ionique

Explique la rétention par échange de cations et d'anions et la détection par conductivité supprimée pour les ions. La chromatographie ionique permet la quantification simultanée d'ions inorganiques et organiques.

Leçon 2 • Fondamentaux de l'HPLC en phase inverse

Établit la rétention en phase inverse sur silice greffée alkyle en utilisant des phases mobiles aqueuses-organiques. La RP-HPLC est le mode dominant et le point de référence pour tous les autres modes HPLC.

Leçon 3 • Composants du système HPLC et chemin d'écoulement

Décrit la pompe, le dégazeur, l'autosampler, le compartiment de colonne et le détecteur comme le chemin d'écoulement HPLC. La spécification de performance de chaque composant limite directement la précision globale du système.

Leçon 4 • Modes en phase normale et HILIC

Contrastes la rétention en phase normale sur des sorbants polaires avec la rétention HILIC des analytes hydrophiles. La HILIC comble le fossé pour les composés polaires mal retenus dans les systèmes en phase inverse.

Leçon 1 • Définition des exigences de la méthode

Traduit les objectifs analytiques en cibles de performance mesurables avant le début des expériences. Des exigences claires évitent la sur-ingénierie et guident un développement efficace.

Leçon 2 • Préparation des échantillons pour la chromatographie

Couvre les techniques d'extraction, de purification et de concentration qui précèdent l'injection chromatographique. Une préparation adéquate de l'échantillon détermine la sensibilité de la méthode et la compatibilité avec la matrice.

Leçon 3 • Stratégie systématique de développement de méthode

Applique des plans d'expériences et des approches à une variable à la fois pour optimiser les conditions chromatographiques. Les stratégies structurées réduisent le temps de développement et améliorent la robustesse.

Leçon 4 • Tests de robustesse et transfert

Utilise les plans de Plackett-Burman pour identifier les paramètres critiques de la méthode et fixer les limites opérationnelles. Les protocoles de transfert de méthode garantissent des performances équivalentes entre les laboratoires et les instruments.

Leçon 1 • Spectrométrie de masse en tandem en chromatographie

Explique les modes de balayage en ions produits, en ions précurseurs et en MRM pour la confirmation structurale et la quantification. La MRM est la référence pour la quantification à l'état de traces dans les matrices biologiques et environnementales complexes.

Leçon 2 • Conception de méthode MS quantitative

Applique la sélection d'étalon interne, l'étalonnage apparié à la matrice et la dilution isotopique pour obtenir une quantification précise. Une conception quantitative appropriée compense les effets de matrice et la variabilité instrumentale.

Leçon 3 • Fondamentaux de la spectrométrie de masse pour les chromatographistes

Introduit l'ionisation, l'analyse de masse et la détection comme les trois étapes de la MS pertinentes pour les méthodes couplées. La compréhension des fondamentaux de la MS est un prérequis pour l'interprétation des données MS chromatographiques.

Leçon 4 • Ionisation en GC-MS et interprétation spectrale

Couvre les modes d'ionisation par impact électronique et par ionisation chimique ainsi que leurs schémas de fragmentation résultants. Les compétences d'interprétation spectrale permettent l'identification des composés à partir de la recherche dans les bibliothèques et de l'analyse manuelle.

Leçon 1 • Protéine A et purification des anticorps

Explique la sélectivité du ligand de la protéine A pour les régions Fc des IgG et son rôle dans la purification des anticorps monoclonaux. La chromatographie sur protéine A est l'étape de capture de plateforme dans la fabrication biopharmaceutique.

Leçon 2 • Sélection et fonctionnement des colonnes SEC

Compare les milieux SEC à base de dextrane, d'agarose et de silice pour les échelles analytique et préparative. La sélection de la colonne équilibre la résolution, la tolérance à la pression et la compatibilité avec les molécules cibles.

Leçon 3 • Fondamentaux de la chromatographie d'affinité

Définit l'interaction ligand-cible biosspécifique comme base de la rétention et de l'élution par affinité. La chromatographie d'affinité atteint des facteurs de purification inaccessibles par d'autres méthodes à une seule étape.

Leçon 4 • Principes de la chromatographie d'exclusion stérique

Explique la distribution de la taille des pores, la limite d'exclusion et la perméation comme base de la séparation SEC. La SEC sépare sans interaction chimique, ce qui la rend idéale pour l'analyse des protéines natives.

Leçon 1 • Chromatographie en fluide supercritique

Décrit les phases mobiles à base de CO2, l'ajout de modificateur et la régulation de la contre-pression dans les systèmes SFC. La SFC excelle dans les séparations chirales et offre une sélectivité orthogonale à l'HPLC en phase inverse.

Leçon 2 • Chromatographie liquide à ultra-haute performance

Explique les particules de moins de 2 microns, le fonctionnement à pression élevée et la dispersion réduite dans les systèmes UHPLC. L'UHPLC offre des analyses plus rapides et une résolution plus élevée par rapport à l'HPLC conventionnelle.

Leçon 3 • Électrochromatographie capillaire et microfluidique

Couvre les séparations entraînées par flux électroosmotique dans des capillaires remplis et des formats sur puce. Les formats miniaturisés réduisent la consommation de solvant et permettent des applications de criblage à haut débit.

Leçon 4 • Principes de la chromatographie chirale

Explique le modèle d'interaction à trois points et les types de phases stationnaires chirales pour la résolution des énantiomères. Les séparations chirales sont essentielles pour la pureté pharmaceutique et la caractérisation stéréochimique.