Cours de chromatographie

Leçon 1 • Les composants du système chromatographique

Identifie la phase stationnaire, la phase mobile, l'injecteur, la colonne et le détecteur comme les cinq composants essentiels. Explique comment chaque composant influence la qualité de la séparation.

Leçon 2 • Histoire et portée de la chromatographie

Retrace la chromatographie depuis les travaux de Tswett sur les pigments végétaux jusqu'aux techniques couplées modernes. Contextualise la raison pour laquelle la science de la séparation est centrale en chimie analytique.

Leçon 3 • Élargissement de bande et théorie des plateaux

Explique les plateaux théoriques, la HETP et l'équation de van Deemter comme métriques d'efficacité. Relie chaque terme d'élargissement aux variables opératoires pratiques.

Leçon 4 • Concepts de rétention et de sélectivité

Présente le temps de rétention, le facteur de rétention et le facteur de sélectivité comme descripteurs quantitatifs. Montre comment l'ajustement de la chimie de la phase modifie la sélectivité.

Leçon 1 • Préparation et dépôt sur plaque CCM

Couvre la sélection des plaques commerciales, la préparation des échantillons et la technique de dépôt correcte. Un dépôt correct détermine directement la qualité des taches et la reproductibilité des Rf.

Leçon 2 • Principes de la chromatographie plane

Définit la migration de la phase mobile entraînée par capillarité sur des phases stationnaires planes. Distingue la CCM de la chromatographie sur papier par le sorbant et le mécanisme.

Leçon 3 • Sélection de la phase mobile pour la CCM

Applique la série éluotropique et l'appariement de polarité pour choisir des systèmes de solvants efficaces. L'optimisation systématique des solvants réduit le temps de développement par essais et erreurs.

Leçon 4 • Techniques CCM haute performance

Présente les plaques HPTLC, le dépôt automatisé et le balayage densitométrique pour le travail quantitatif. La HPTLC fait le pont entre la CCM qualitative et les méthodes quantitatives instrumentales.

Leçon 1 • Détecteurs GC et leur sélectivité

Compare les détecteurs FID, TCD, ECD, NPD et FPD en termes de sensibilité, de sélectivité et de linéarité. Le choix du détecteur est adapté à la classe d'analyte et aux limites de détection requises.

Leçon 2 • Colonnes GC et phases stationnaires

Classe les colonnes remplies et capillaires par polarité, épaisseur de film et diamètre interne. Le choix de la colonne détermine la sélectivité et est la principale variable de développement de méthode.

Leçon 3 • Techniques d'injection en GC

Compare les modes d'injection split, splitless, on-column et PTV pour différents types d'échantillons. Le choix du mode d'injection contrôle la discrimination, les artefacts de discrimination et les limites de détection.

Leçon 4 • Programmation de température en GC

Explique les analyses isothermes vs. programmées en température et leur effet sur la résolution et la durée d'analyse. Les programmes de température optimisés séparent efficacement les mélanges à large intervalle d'ébullition.

Leçon 1 • Chromatographie par échange d'ions et chromatographie ionique

Explique la rétention par échange de cations et d'anions et la détection par conductivité supprimée pour les ions. La chromatographie ionique permet la quantification simultanée d'ions inorganiques et organiques.

Leçon 2 • Fondamentaux de la HPLC en phase inverse

Établit la rétention en phase inverse sur silice greffée alkyle en utilisant des phases mobiles aqueuses-organiques. La RP-HPLC est le mode dominant et le point de référence pour tous les autres modes HPLC.

Leçon 3 • Composants du système HPLC et chemin d'écoulement

Décrit la pompe, le dégazeur, l'échantillonneur automatique, le compartiment de colonne et le détecteur comme le chemin d'écoulement HPLC. Les spécifications de performance de chaque composant limitent directement la précision globale du système.

Leçon 4 • Modes en phase normale et HILIC

Oppose la rétention en phase normale sur des sorbants polaires à la rétention HILIC des analystes hydrophiles. La HILIC comble le fossé pour les composés polaires mal retenus dans les systèmes en phase inverse.

Leçon 1 • Définition des exigences de la méthode

Traduit les objectifs analytiques en cibles de performance mesurables avant le début de l'expérimentation. Des exigences claires empêchent la sur-ingénierie et guident un développement efficace.

Leçon 2 • Préparation d'échantillon pour la chromatographie

Couvre les techniques d'extraction, de purification et de concentration qui précèdent l'injection chromatographique. Une préparation d'échantillon adéquate détermine la sensibilité de la méthode et la compatibilité avec la matrice.

Leçon 3 • Stratégie systématique de développement de méthode

Applique les plans d'expériences et l'approche un facteur à la fois pour optimiser les conditions chromatographiques. Les stratégies structurées réduisent le temps de développement et améliorent la robustesse.

Leçon 4 • Tests de robustesse et transfert

Utilise des plans de Plackett-Burman pour identifier les paramètres critiques de la méthode et définir les limites opérationnelles. Les protocoles de transfert de méthode garantissent des performances équivalentes entre les laboratoires et les instruments.

Leçon 1 • Spectrométrie de masse en tandem en chromatographie

Explique les modes de balayage des ions produits, des ions précurseurs et MRM pour la confirmation structurale et la quantification. Le MRM est la référence absolue pour la quantification à l'état de traces dans les matrices biologiques et environnementales complexes.

Leçon 2 • Conception de méthode MS quantitative

Applique la sélection de l'étalon interne, l'étalonnage adapté à la matrice et la dilution isotopique pour obtenir une quantification précise. Une conception quantitative appropriée compense les effets de matrice et la variabilité instrumentale.

Leçon 3 • Fondamentaux de la spectrométrie de masse pour les chromatographistes

Présente l'ionisation, l'analyse en masse et la détection comme les trois étapes de la MS pertinentes pour les méthodes couplées. La compréhension des fondamentaux de la MS est un prérequis pour interpréter les données MS chromatographiques.

Leçon 4 • Ionisation en GC-MS et interprétation spectrale

Couvre les modes d'ionisation par impact électronique et par ionisation chimique et leurs schémas de fragmentation résultants. Les compétences en interprétation spectrale permettent l'identification des composés à partir de la recherche dans des bibliothèques et de l'analyse manuelle.

Leçon 1 • Protéine A et purification des anticorps

Explique la sélectivité du ligand Protéine A pour les régions Fc des IgG et son rôle dans la purification des anticorps monoclonaux. La chromatographie sur protéine A est l'étape de capture de plateforme dans la fabrication biopharmaceutique.

Leçon 2 • Sélection et fonctionnement des colonnes SEC

Compare les milieux SEC à base de dextran, d'agarose et de silice pour les échelles analytiques et préparatives. Le choix de la colonne équilibre la résolution, la tolérance à la pression et la compatibilité avec les molécules cibles.

Leçon 3 • Fondamentaux de la chromatographie d'affinité

Définit l'interaction ligand-cible biospecifique comme base de la rétention et de l'élution par affinité. La chromatographie d'affinité atteint des facteurs de purification inaccessibles par toute autre méthode en une seule étape.

Leçon 4 • Principes de la chromatographie d'exclusion stérique

Explique la distribution de la taille des pores, la limite d'exclusion et la perméation comme base de la séparation SEC. La SEC sépare sans interaction chimique, ce qui la rend idéale pour l'analyse des protéines natives.

Leçon 1 • Chromatographie en fluide supercritique

Décrit les phases mobiles à base de CO2, l'ajout de modificateur et la régulation de la contre-pression dans les systèmes SFC. La SFC excelle dans les séparations chirales et offre une sélectivité orthogonale à la HPLC en phase inverse.

Leçon 2 • Chromatographie liquide ultra-haute performance

Explique les particules sub-2 microns, le fonctionnement à pression élevée et la dispersion réduite dans les systèmes UHPLC. L'UHPLC offre des analyses plus rapides et une résolution plus élevée par rapport à la HPLC conventionnelle.

Leçon 3 • Électrochromatographie capillaire et microfluidique

Couvre les séparations entraînées par flux électroosmotique dans des capillaires remplis et des formats sur puce. Les formats miniaturisés réduisent la consommation de solvant et permettent des applications de criblage à haut débit.

Leçon 4 • Principes de la chromatographie chirale

Explique le modèle d'interaction à trois points et les types de phases stationnaires chirales pour la résolution des énantiomères. Les séparations chirales sont essentielles pour la pureté pharmaceutique et la caractérisation stéréochimique.