Curso Básico de Eletroforese

Aula 1 • Desenvolvimento Histórico da Eletroforese

Traça os marcos importantes desde o trabalho de fronteira móvel de Tiselius até os sistemas modernos de gel. Fornece contexto para entender a diversidade de técnicas atuais.

Aula 2 • Eletricidade e Movimento Iônico

Aborda carga, voltagem, corrente e resistência conforme se aplicam a íons em solução. Conecta a lei de Ohm à configuração prática de eletroforese.

Aula 3 • Tampões e Controle de pH

Ensina a seleção de tampão, força iônica e estabilidade do pH durante uma corrida. O tamponamento adequado é essencial para separações reproduzíveis.

Aula 4 • Forças Motrizes da Separação

Define a mobilidade eletroforética e as forças que se opõem à migração. Estabelece a base teórica para a resolução das bandas.

Aula 1 • Critérios de Seleção da Matriz

Orienta decisões entre agarose e poliacrilamida com base no tipo e tamanho da molécula. Reforça a ligação entre a escolha da matriz e os objetivos experimentais.

Aula 2 • Técnicas de Preparação do Gel

Fornece protocolos passo a passo para vazar ambos os tipos de gel de forma segura e reproduzível. Enfatiza desgaseificação, nivelamento e posicionamento do pente.

Aula 3 • Avaliação da Qualidade do Gel

Ensina verificações visuais e funcionais da integridade do gel antes do carregamento das amostras. A má qualidade do gel é uma das principais causas de separações mal sucedidas.

Aula 4 • Fundamentos do Gel de Agarose

Descreve a estrutura do polímero de agarose, o tamanho dos poros e os efeitos da concentração. Conecta a porcentagem do gel à faixa de tamanho das moléculas resolvidas.

Aula 1 • Condições e Parâmetros de Corrida

Define voltagem, tempo de corrida e seleção de tampão para géis de ácidos nucleicos. Otimizar esses parâmetros equilibra velocidade e resolução.

Aula 2 • Solução de Problemas em Géis de Ácidos Nucleicos

Identifica causas de arraste, bandas ausentes e distorção das canaletas. O diagnóstico sistemático previne falhas experimentais repetidas.

Aula 3 • Preparação de Amostras para Ácidos Nucleicos

Aborda a quantificação de DNA e RNA, avaliação de pureza e composição do tampão de carregamento. A preparação adequada da amostra previne arraste e distorção das canaletas.

Aula 4 • Métodos de Coloração e Visualização

Compara brometo de etídio, SYBR Safe e outros corantes intercalantes para detecção de ácidos nucleicos. Aborda sensibilidade, segurança e requisitos de imagem.

Aula 1 • Estimativa de Peso Molecular

Ensina a construção de curvas padrão a partir de escadas de proteínas para estimar pesos moleculares desconhecidos. A estimativa precisa requer a seleção adequada da escada.

Aula 2 • Design e Vazamento do Sistema de Gel

Aborda a composição do gel de empilhamento e do gel de resolução, diferenças de pH e sistemas de tampão descontínuos. O design adequado melhora a entrada e a resolução das bandas.

Aula 3 • Preparação de Amostras de Proteínas

Detalha métodos de lise, quantificação de proteínas e preparação do tampão de amostra para SDS-PAGE. A preparação consistente da amostra é crítica para padrões de banda reproduzíveis.

Aula 4 • Corrida e Coloração de Géis de SDS-PAGE

Fornece protocolos para condições de eletroforese, coloração com Coomassie e coloração com prata. A escolha da coloração depende da sensibilidade e do uso subsequente.

Aula 1 • Coloração por Atividade Após PAGE Nativo

Aborda ensaios de atividade enzimática no gel para identificar proteínas funcionais após separação nativa. Relaciona a posição da banda à função enzimática.

Aula 2 • Técnica de PAGE Nativo Azul

Apresenta o Coomassie G-250 como agente de deslocamento de carga no PAGE nativo azul para proteínas de membrana. Esta técnica resolve complexos proteicos mantendo interações nativas.

Aula 3 • Seleção de Tampão e pH para Géis Nativos

Orienta a escolha de pH e tampão para manter a carga e a estabilidade das proteínas durante corridas nativas. As condições do tampão afetam diretamente a direção da migração e a nitidez das bandas.

Aula 4 • Princípios da Eletroforese Nativa

Contrasta o PAGE nativo com o SDS-PAGE, enfatizando que a separação depende da carga, tamanho e forma. Estabelece quando as condições nativas são necessárias.

Aula 1 • Reidratação e Carregamento de Tiras de IPG

Detalha protocolos de reidratação, métodos de carregamento de amostra e carregamento por copo versus reidratação no gel. O carregamento correto maximiza a entrada de proteínas e a resolução.

Aula 2 • Princípios da Focalização Isoelétrica

Explica como as proteínas migram para seu ponto isoelétrico em um gradiente de pH. A IEF fornece a primeira dimensão da eletroforese bidimensional.

Aula 3 • Condições de Corrida da IEF

Aborda protocolos de rampa de voltagem, total de volt-hora e controle de temperatura para IEF. Condições de corrida adequadas previnem a precipitação de proteínas no pI.

Aula 4 • Coloração de Géis 2D e Análise de Imagem

Aborda coloração fluorescente e coloidal para géis 2D e detecção de spots baseada em software. A análise quantitativa requer coloração consistente e imageamento calibrado.

Aula 1 • Tipos de Capilares e Revestimentos

Compara capilares de sílica fundida nua, revestidos e preenchidos com gel para diferentes analitos. A seleção do capilar determina o controle do EOF e a interação com o analito.

Aula 2 • Sistemas de Detecção em CE

Aborda detecção por absorbância UV, fluorescência induzida por laser e espectrometria de massas para CE. A escolha do detector rege a sensibilidade e a capacidade de identificação do analito.

Aula 3 • Desenvolvimento e Otimização de Métodos em CE

Orienta a seleção de tampão, voltagem e otimização da temperatura para separações em CE. O desenvolvimento sistemático de métodos reduz o tempo de corrida mantendo a resolução.

Aula 4 • Fundamentos da Eletroforese Capilar

Apresenta a instrumentação de CE, o fluxo eletrosmótico e os modos de separação. A CE oferece maior resolução e automação em comparação com os formatos de gel em placa.

Aula 1 • Documentação e Integridade dos Dados

Estabelece padrões para captura de imagem, formatos de arquivo e registros em caderno de laboratório. A documentação adequada suporta a reprodutibilidade e a conformidade regulatória.

Aula 2 • Análise Estatística de Dados de Gel

Aplica estatística descritiva, análise de réplicas e teste de significância aos resultados de eletroforese. O rigor estatístico distingue diferenças reais do ruído experimental.

Aula 3 • Análise Quantitativa de Bandas e Spots

Ensina densitometria, normalização de canaletas e subtração de fundo para imagens de gel. A quantificação precisa requer imageamento calibrado e protocolos consistentes.

Aula 4 • Artefatos Comuns e Suas Causas

Cataloga artefatos de gel, incluindo fantasmas, bandas satélites e migração irregular. Reconhecer artefatos previne a má interpretação dos resultados.