Cours de centrifugation

Leçon 1 • Principes de sédimentation

Explique la loi de Stokes, les coefficients de sédimentation et le comportement des particules dans un champ centrifuge. Relie la taille des particules, la densité et la viscosité à l'efficacité de la séparation.

Leçon 2 • Physique de la force centrifuge

Couvre les forces centrifuges et centripètes, la vitesse angulaire et la force centrifuge relative (FCR). Établit les lois physiques régissant tout fonctionnement de centrifugeuse.

Leçon 3 • Relations de flottabilité et de densité

Introduit la densité de flottaison, la densité effective des particules et la flottation. Explique comment les différences de densité entre les particules et le milieu entraînent la séparation.

Leçon 1 • Systèmes de température et de vide

Décrit les unités de réfrigération, les capteurs de température et les chambres à vide dans les ultracentrifugeuses. Explique comment le contrôle thermique préserve les échantillons biologiques et chimiques.

Leçon 2 • Conception et sélection du rotor

Couvre les rotors à angle fixe, à godets oscillants, verticaux et quasi-verticaux. Les étudiants apprennent comment la géométrie du rotor affecte le parcours de sédimentation et le temps de passage.

Leçon 3 • Tubes, bouteilles et adaptateurs

Passe en revue les matériaux des tubes de centrifugeuse, les plages de volume et les types de fermeture. Relie la sélection du contenant à la compatibilité chimique et à la tolérance maximale de FCR.

Leçon 4 • Systèmes d'entraînement et contrôle de la vitesse

Explique les types de moteurs, les entraînements sans balais et la régulation électronique de la vitesse. Montre comment les profils d'accélération et de décélération affectent l'intégrité de l'échantillon.

Leçon 1 • Cadres de conformité réglementaire

Passe en revue les normes de santé au travail, de sécurité en laboratoire et de certification des équipements applicables aux centrifugeuses. Prépare les étudiants à auditer la conformité dans leurs installations.

Leçon 2 • Biosécurité et niveaux de confinement

Applique les exigences de niveau de biosécurité à l'utilisation de la centrifugeuse avec des agents infectieux. Couvre les rotors scellés, les enceintes de biosécurité et les procédures de décontamination.

Leçon 3 • Équipement de protection individuelle

Spécifie la sélection d'EPI pour différents scénarios de centrifugeuse, y compris les matières infectieuses et dangereuses. Relie le choix de l'EPI au niveau de danger et aux directives réglementaires.

Leçon 4 • Procédures d'intervention d'urgence

Définit les réponses étape par étape à une défaillance du rotor, à une rupture de tube et aux déversements dangereux à l'intérieur de la centrifugeuse. Réduit les dommages grâce à une action systématique et pratiquée.

Leçon 1 • Procédures de chargement et de déchargement

Détaille les séquences de chargement sécuritaires du rotor, le couple du couvercle et le déchargement après le passage pour préserver les culots et les gradients. La discipline procédurale prévient la perte et la contamination de l'échantillon.

Leçon 2 • Équilibrage précis des rotors

Enseigne les méthodes d'équilibrage gravimétrique et volumétrique pour tous les types de rotors. Le déséquilibre est la principale cause de contrainte sur le rotor et de dommages à l'instrument.

Leçon 3 • Remplissage du tube et contrôle du volume

Spécifie les volumes de remplissage pour différents types de tubes et de rotors afin d'éviter l'affaissement ou le débordement. Un remplissage correct est essentiel à la fois pour la sécurité et la qualité de la séparation.

Leçon 4 • Sélection du tampon et du milieu

Explique comment la composition du tampon, le pH, la force ionique et l'osmolarité affectent l'intégrité des particules. Guide les étudiants dans le choix de milieux qui préservent la fonction de l'échantillon.

Leçon 1 • Flux de travail de fractionnement subcellulaire

Présente des protocoles standard pour isoler les noyaux, les mitochondries, les microsomes et le cytosol. Les étudiants associent chaque fraction à son origine biologique et à son marqueur attendu.

Leçon 2 • Principes de la sédimentation différentielle

Explique la logique de sédimentation séquentielle, la composition du culot et l'entraînement du surnageant. Établit la base conceptuelle pour tous les flux de travail de fractionnement différentiel.

Leçon 3 • Optimisation des paramètres de vitesse et de temps

Guide la sélection des paramètres à l'aide des coefficients de sédimentation et des calculs de facteur k. L'optimisation réduit le temps de passage tout en maintenant la pureté de la fraction.

Leçon 1 • Centrifugation par taux de sédimentation

Applique une sédimentation dépendante du temps pour séparer les particules par taille dans un gradient stabilisant. Les étudiants calculent les conditions de passage pour positionner les bandes aux endroits souhaités.

Leçon 2 • Techniques de formation des gradients

Couvre les méthodes de préparation de gradients par paliers, linéaires et continus, y compris les appareils à gradient. La forme du gradient contrôle directement la résolution et le temps de séparation.

Leçon 3 • Fractionnement et analyse du gradient

Décrit les méthodes de déplacement vers le haut, de ponction du tube et de collecteur de fractions pour la récolte du gradient. L'analyse des fractions confirme l'identité et la pureté des bandes.

Leçon 4 • Centrifugation isopycnique

Utilise l'équilibrage à la densité de flottaison pour séparer les particules indépendamment de leur taille. Couvre les gradients d'équilibre au CsCl pour l'isolement de l'ADN et de l'ARN.

Leçon 1 • Fractionnement des lipoprotéines et des membranes

Utilise une ultracentrifugation séquentielle et un ajustement de densité au KBr pour isoler les classes de lipoprotéines. L'isolement de la fraction membranaire soutient l'analyse des lipides et de la protéomique.

Leçon 2 • Notions essentielles de fonctionnement de l'ultracentrifugeuse

Couvre le démarrage du système de vide, l'installation du rotor et la programmation des paramètres de passage pour les ultracentrifugeuses. Un fonctionnement correct prévient une défaillance catastrophique du rotor à des vitesses extrêmes.

Leçon 3 • Isolement des exosomes et des vésicules

Présente les protocoles d'ultracentrifugation différentielle et de coussin pour l'isolement des vésicules extracellulaires. Les étudiants obtiennent des culots d'exosomes reproductibles à partir de liquides biologiques.

Leçon 4 • Purification de virus et de vecteurs viraux

Applique des gradients par paliers d'iodixanol et des bandes au CsCl pour purifier les particules virales destinées à la recherche et à la thérapie génique. Le titre et les exigences de pureté guident la conception du protocole.

Leçon 1 • Entretien et inspection du rotor

Couvre le nettoyage du rotor, la détection de la corrosion, l'identification des fissures de contrainte et les critères de retrait. L'intégrité du rotor est le facteur de sécurité le plus critique dans la centrifugation.

Leçon 2 • Calendriers d'entretien préventif

Définit les tâches d'entretien quotidiennes, hebdomadaires, mensuelles et annuelles pour les rotors, les chambres et les systèmes d'entraînement. Un entretien programmé prolonge la durée de vie de l'instrument et prévient les temps d'arrêt imprévus.

Leçon 3 • Calibration et vérification des performances

Décrit les procédures de calibration de la vitesse, de la température et de la minuterie à l'aide d'étalons traçables. Des performances vérifiées assurent la reproductibilité des données et la conformité réglementaire.

Leçon 4 • Assurance qualité et documentation

Établit les pratiques de tenue du journal de bord, de signalement des écarts et les protocoles de qualification de l'instrument. Une documentation robuste soutient les audits, la reproductibilité et l'amélioration continue.