Curso de Hplc

Aula 1 • Modos de Cromatografia Líquida

Aborda os modos de fase reversa, fase normal, troca iónica e exclusão por tamanho. Os estudantes associam as propriedades do analito ao modo de separação adequado.

Aula 2 • Conceitos Cromatográficos Fundamentais

Define retenção, seletividade, resolução e eficiência usando a equação de van Deemter. Estes termos sustentam todas as decisões analíticas tomadas nos capítulos seguintes.

Aula 3 • História e Âmbito da HPLC

Traça a evolução da HPLC desde a cromatografia líquida clássica até à instrumentação moderna. Estabelece por que razão a HPLC é a técnica de separação analítica dominante.

Aula 1 • Introdução da Amostra e Amostradores Automáticos

Descreve válvulas de injeção manuais e o funcionamento de amostradores automáticos, incluindo o volume do loop e a precisão da injeção. A técnica de injeção afeta diretamente a forma do pico e a reprodutibilidade.

Aula 2 • Sistemas de Distribuição de Solvente

Abrange a conceção do reservatório, métodos de desgaseificação e tipos de bomba, incluindo bombas alternativas e de seringa. A correta distribuição do solvente é um pré-requisito para separações reprodutíveis.

Aula 3 • Detetores em HPLC

Aborda detetores de UV-Vis, matriz de fotodíodos, fluorescência, índice de refração e eletroquímicos. A escolha do detetor é adequada às propriedades do analito e aos requisitos de sensibilidade.

Aula 4 • Sistemas de Dados e Software de Cromatografia

Apresenta sistemas de dados de cromatografia para controlo de instrumentos, aquisição de dados e elaboração de relatórios. O manuseamento preciso dos dados é essencial para a conformidade regulamentar e a integridade dos resultados.

Aula 1 • Princípios de Seleção de Solventes

Aplica índices de polaridade e força do solvente para escolher modificadores orgânicos primários. A seleção do solvente é o primeiro ponto de controlo para a retenção e seletividade.

Aula 2 • Conceção de Método Isocrático

Guia os estudantes através do desenvolvimento sistemático de métodos isocráticos usando ajustes de força e seletividade do solvente. Os métodos isocráticos são mais simples de transferir e validar.

Aula 3 • Seleção de Tampão e Controlo de pH

Aborda tipos de tampão, concentração e efeitos do pH na retenção de analitos ionizáveis. Um tamponamento adequado previne o aparecimento de cauda nos picos e garante a reprodutibilidade diária.

Aula 4 • Aditivos e Reagentes de Par Iónico

Apresenta reagentes de par iónico, supressores de iões e aditivos orgânicos para analitos desafiantes. Estas ferramentas estendem a HPLC de fase reversa a compostos altamente polares ou iónicos.

Aula 1 • Ferramentas de Caracterização e Seleção de Colunas

Usa o modelo de subtração hidrofóbica e bases de dados de colunas para comparar e selecionar colunas objetivamente. A seleção sistemática reduz a tentativa e erro no desenvolvimento de métodos.

Aula 2 • Fases Estacionárias Especializadas e Quirais

Apresenta fases HILIC, de modo misto e quirais para separações polares, iónicas e enantiómeras. Estas fases abordam analitos que a fase reversa não consegue reter adequadamente.

Aula 3 • Fases Ligadas em Fase Reversa

Compara fases C18, C8, C4, fenilo e de incorporação polar quanto a diferenças de seletividade. A seleção da fase é a ferramenta principal para resolver analitos que coeluem.

Aula 4 • Fases Estacionárias à Base de Sílica

Examina a sílica nua e as fases de sílica ligada, incluindo a química de superfície e a silanização. A sílica continua a ser o material de suporte dominante nas colunas modernas de HPLC.

Aula 1 • Estratégias de Exploração Sistemática

Aplica painéis de exploração de colunas e fases móveis para identificar rapidamente condições iniciais promissoras. Uma exploração eficiente reduz o tempo de desenvolvimento sem sacrificar a exaustividade.

Aula 2 • Integração da Preparação da Amostra

Alinhar a estratégia de preparação da amostra com os requisitos do método de HPLC para proteger a coluna e melhorar a sensibilidade. Uma preparação inadequada da amostra é uma das principais causas de falha do método.

Aula 3 • Documentação e Transferência do Método

Produz documentação completa do método, incluindo critérios de aptidão do sistema e protocolos de transferência. Uma documentação exaustiva permite a execução reprodutível em diferentes laboratórios.

Aula 4 • Definição dos Requisitos do Método

Estabelecer perfis analíticos alvo, propriedades físico-químicas do analito e contexto regulamentar antes de iniciar o trabalho instrumental. Objetivos claros previnem retrabalhos dispendiosos posteriormente.

Aula 1 • Avaliação Estatística dos Resultados

Aplica testes de outlier, intervalos de confiança e estimativa de incerteza aos dados quantitativos de HPLC. O rigor estatístico garante que os resultados são defensáveis em contextos regulamentares e científicos.

Aula 2 • Integração e Quantificação de Picos

Aplica parâmetros de integração corretos para medir com precisão a área e altura do pico para quantificação. Os erros de integração são uma fonte primária de imprecisão quantitativa em HPLC.

Aula 3 • Resolução de Problemas em Cromatogramas por Padrões de Dados

Diagnostica anomalias comuns nos dados — picos fantasmas, deriva da linha de base e variações no tempo de retenção — a partir de padrões do cromatograma. O reconhecimento de padrões acelera a identificação da causa raiz sem desmontagem do instrumento.

Aula 4 • Estratégias de Calibração

Compara a calibração por padrão externo, padrão interno e adição de padrão para diferentes matrizes. A seleção da estratégia de calibração afeta diretamente a precisão e a correção do viés da matriz.

Aula 1 • Limites de Deteção e Quantificação

Calcula o LOD e LOQ usando abordagens de relação sinal-ruído e regressão e confirma-os experimentalmente. Estes limites definem a gama de medição mais baixa fiável do método.

Aula 2 • Especificidade, Linearidade e Gama

Demonstra a especificidade através de degradação forçada e avalia a linearidade em toda a gama analítica. Estes parâmetros confirmam que o método mede apenas o analito pretendido com precisão.

Aula 3 • Quadro de Validação e Contexto Regulamentar

Apresenta os parâmetros de validação definidos por diretrizes harmonizadas internacionais para procedimentos analíticos. A compreensão do quadro previne lacunas que originam constatações regulamentares.

Aula 4 • Teste de Robustez e Aptidão do Sistema

Usa designs de Plackett-Burman para avaliar a robustez do método e define limites de aptidão do sistema a partir dos dados de validação. O teste de robustez identifica parâmetros críticos do método antes do uso de rotina.

Aula 1 • Degradação do Desempenho da Coluna

Identifica causas de perda de eficiência, cauda nos picos e formação de vazio na coluna e aplica ações corretivas. A saúde da coluna determina diretamente a qualidade da separação e a validade do método.

Aula 2 • Metodologia Sistemática de Resolução de Problemas

Apresenta uma abordagem estruturada de isolamento de falhas usando árvores lógicas sintoma-causa-remédio. Um método sistemático previne diagnósticos errados e substituição desnecessária de componentes.

Aula 3 • Problemas na Bomba e no Sistema de Pressão

Diagnostica falhas de pressão alta, pressão baixa e flutuação de pressão no sistema de distribuição de solvente. O comportamento da pressão é o indicador mais informativo da saúde do sistema.

Aula 4 • Programas de Manutenção Preventiva

Concebe intervalos de manutenção programados para bombas, selos, lâmpadas e amostradores automáticos para prevenir paragens não planeadas. A manutenção preventiva é mais económica do que a reparação reativa.