Curso de Cromatografia por Exclusão de Tamanho

Aula 1 • Princípios de Separação Cromatográfica

Aborda as interações fase estacionária/fase móvel e os fundamentos do alargamento de banda. Estabelece o vocabulário utilizado ao longo do curso.

Aula 2 • Base Física da Exclusão por Tamanho

Explica a exclusão estérica e a difusão nos poros como o único mecanismo de separação. Conecta a geometria dos poros à discriminação por tamanho molecular.

Aula 3 • Principais Termos e Parâmetros da SEC

Define volume de vazios, volume de eluição e coeficiente de distribuição Kd. Fornece a linguagem quantitativa necessária para todos os capítulos subsequentes.

Aula 1 • Cuidados e Vida Útil da Coluna

Aborda armazenamento, regeneração e monitoramento de desempenho para maximizar a vida útil da coluna. Impacta diretamente a reprodutibilidade dos dados e a eficiência de custos.

Aula 2 • Tamanho de Poros e Faixa de Fracionamento

Explica como o tamanho nominal dos poros determina a janela de fracionamento do peso molecular. Orienta a seleção da coluna para proteínas, polímeros e moléculas pequenas.

Aula 3 • Químicas de Partículas Porosas

Examina suportes de sílica, dextrana reticulada, agarose e polímeros sintéticos. Relaciona a química à compatibilidade química e à faixa operacional.

Aula 1 • Preparo de Amostras para SEC

Aborda filtração, troca de tampão e etapas de concentração antes da injeção. Previne a contaminação da coluna e garante dados precisos de peso molecular.

Aula 2 • Otimização da Vazão e Pressão

Relaciona a vazão à resolução por meio da equação de van Deemter adaptada para SEC. Equilibra o tempo de análise com a eficiência dos picos.

Aula 3 • Efeitos da Temperatura na SEC

Descreve como a temperatura altera a viscosidade, a difusão e as interações secundárias. Orienta a seleção da temperatura para separações reprodutíveis.

Aula 4 • Princípios de Composição da Fase Móvel

Explica como a força iônica, o pH e os modificadores orgânicos suprimem interações inespecíficas. Estabelece critérios para escolher solventes SEC aquosos vs. orgânicos.

Aula 1 • Detecção por Absorbância UV-Vis

Explica seleção de comprimento de onda, linearidade do detector e estabilidade da linha de base para detecção UV. Abrange detecção de proteínas a 280 nm e detecção de ácidos nucleicos a 260 nm.

Aula 2 • Arquiteturas de Sistemas HPLC e FPLC

Compara plataformas de cromatografia líquida de alta e baixa pressão usadas para SEC. Orienta a seleção do instrumento com base na pressão, escala e tipo de amostra.

Aula 3 • Bombas, Injetores e Tubulações

Detalha tipos de bombas, operação da válvula de injeção e volume morto da tubulação. Minimiza o alargamento de banda extra-coluna para resultados precisos.

Aula 4 • Acoplamento com Viscosimetria e Espectrometria de Massas

Aborda viscosimetria online para viscosidade intrínseca e acoplamento SEC-EM para confirmação de identidade. Expande as informações analíticas obtidas em uma única corrida de SEC.

Aula 1 • Médias de Peso Molecular e Dispersidade

Calcula Mn, Mw, Mz e dispersidade Đ a partir de dados cromatográficos. Conecta as estatísticas de distribuição às propriedades do material e à qualidade do produto.

Aula 2 • Calibração Relativa com Padrões

Usa padrões de distribuição estreita para construir uma curva de log MW vs. volume de eluição. Estabelece a abordagem de calibração mais comum em análises de polímeros e proteínas.

Aula 3 • Peso Molecular Absoluto com MALS

Deriva a MW absoluta diretamente do espalhamento de luz sem padrões de calibração. Elimina o viés da química da coluna para macromoléculas complexas.

Aula 4 • Validação de Métodos de Calibração

Aplica critérios de exatidão, precisão, linearidade e faixa à validação da calibração. Garante a integridade dos dados para ambientes regulamentados e de pesquisa.

Aula 1 • Otimização do Volume de Injeção e Carga da Amostra

Determina o volume máximo de injeção e a carga de massa antes da degradação da resolução. Previne artefatos de sobrecarga em SEC analítica e preparativa.

Aula 2 • Definindo Metas e Requisitos do Método

Traduz objetivos analíticos em critérios mensuráveis de desempenho do método. Alinha as escolhas de coluna, fase móvel e detector com o uso pretendido.

Aula 3 • Estratégias de Melhoria da Resolução

Aplica acoplamento de colunas, ajuste de vazão e ajuste de temperatura para melhorar a resolução. Fornece ferramentas práticas para separações difíceis.

Aula 4 • Teste de Robustez e Resistência do Método

Avalia a sensibilidade do método a pequenas alterações deliberadas em parâmetros-chave. Identifica parâmetros críticos e define faixas operacionais aceitáveis.

Aula 1 • Análise de Agregação de Proteínas

Usa SEC para quantificar o conteúdo de monômero, dímero e agregados de ordem superior em amostras de proteínas. Apoia diretamente a avaliação da qualidade do insumo farmacêutico ativo.

Aula 2 • Estudos de Formulação e Estabilidade

Monitora a agregação e fragmentação durante estudos de estabilidade acelerada e em tempo real. Relaciona os dados de SEC às decisões de formulação e previsões de prazo de validade.

Aula 3 • Análise de Ácidos Nucleicos e Oligonucleotídeos

Adapta as condições de SEC para perfil de tamanho de DNA, RNA e oligonucleotídeos. Aborda requisitos exclusivos de fase móvel e coluna para ácidos nucleicos.

Aula 4 • Caracterização de Anticorpos Monoclonais

Aplica SEC para avaliar variantes de tamanho de mAb, fragmentos e integridade do conjugado. Abrange condições de método específicas para IgG e conjugados anticorpo-fármaco.

Aula 1 • Redação de Laudos Técnicos para SEC

Estrutura laudos de SEC com seções de métodos, resultados, discussão e conclusões. Comunica descobertas claramente a partes interessadas científicas e não científicas.

Aula 2 • Integridade de Dados e Registros Eletrônicos

Aplica princípios de trilha de auditoria, controle de acesso e revisão de dados aos sistemas de software SEC. Atende às expectativas das estruturas de integridade de dados em indústrias regulamentadas.

Aula 3 • Interpretação de Cromatogramas e Integração de Picos

Aplica correção de linha de base, detecção de picos e algoritmos de integração a cromatogramas de SEC. Garante cálculos precisos de área percentual e peso molecular.

Aula 4 • Validação de Métodos Analíticos para Ambientes Regulamentados

Executa parâmetros de validação incluindo especificidade, linearidade, exatidão e precisão. Prepara documentação para submissão regulatória e prontidão para auditoria.