Curso de Diagnóstico Molecular Clínico

Aula 1 • Estrutura e Função dos Ácidos Nucleicos

A estrutura do DNA e RNA, o pareamento de bases e a replicação são examinados. Essa base sustenta a compreensão de todos os métodos de amplificação e detecção subsequentes.

Aula 2 • Biologia Celular para Diagnóstico

Os compartimentos celulares e a localização dos ácidos nucleicos são revisados. Os alunos conectam a função das organelas à coleta de espécimes e ao rendimento de ácidos nucleicos.

Aula 3 • Fundamentos de Genética e Genômica

Herança mendeliana, mutações e variação genômica são introduzidos. Esses conceitos sustentam a interpretação de resultados de testes genéticos e de doenças infecciosas.

Aula 4 • Enzimas em Biologia Molecular

As principais enzimas usadas em ensaios moleculares são descritas com seus mecanismos. Os alunos reconhecem como as propriedades das enzimas determinam as escolhas de desenho do ensaio.

Aula 1 • Plataformas de Extração Automatizada

Sistemas automatizados de manipulação de líquidos para extração de ácidos nucleicos são comparados. Os alunos operam plataformas e reconhecem os benefícios da integração do fluxo de trabalho em laboratórios de alto volume.

Aula 2 • Quantificação de Ácidos Nucleicos e Avaliação de Qualidade

Métodos espectrofotométricos, fluorométricos e eletroforéticos para avaliar a pureza e o rendimento de ácidos nucleicos são abordados. As métricas de qualidade orientam as decisões sobre prosseguir com ensaios posteriores.

Aula 3 • Tipos de Espécimes e Padrões de Coleta

Os tipos de espécimes apropriados para ensaios moleculares são identificados juntamente com os requisitos de coleta. A coleta adequada previne diretamente erros pré-analíticos que comprometem os resultados.

Aula 4 • Princípios da Extração de Ácidos Nucleicos

Os princípios químicos e físicos da lise celular e purificação de ácidos nucleicos são explicados. Os alunos selecionam métodos de extração com base no tipo de espécime e nas necessidades do ensaio posterior.

Aula 1 • Fundamentos da Reação em Cadeia da Polimerase

As etapas de termociclagem da PCR, o desenho de primers e os componentes da reação são examinados em detalhes. O domínio da mecânica da PCR é pré-requisito para todos os métodos de amplificação avançados.

Aula 2 • PCR com Transcriptase Reversa

A conversão de RNA em cDNA e a amplificação subsequente são detalhadas para a detecção de alvos de RNA. Os alunos aplicam a RT-PCR ao diagnóstico de vírus respiratórios e expressão gênica.

Aula 3 • PCR Multiplex e Desenho de Painéis

A amplificação simultânea de múltiplos alvos em uma única reação é abordada. Os alunos equilibram a compatibilidade de primers, a sensibilidade e a utilidade clínica na construção do painel.

Aula 4 • Métodos de Amplificação Isotérmica

LAMP, NASBA e SDA são apresentados como alternativas à amplificação baseada em termociclagem. Os alunos avaliam métodos isotérmicos para ambientes de ponto de atendimento e com recursos limitados.

Aula 1 • Genotipagem Baseada em Microarranjos

Plataformas de microarranjos de DNA para genotipagem simultânea de milhares de variantes são introduzidas. Os alunos avaliam dados de arranjos para tipagem de patógenos e painéis farmacogenômicos.

Aula 2 • Detecção Baseada em Hibridização

Os princípios e formatos de hibridização de sondas, incluindo Southern blot e ensaios de sonda em linha, são abordados. Os alunos aplicam métodos de hibridização à identificação de patógenos e detecção de resistência.

Aula 3 • Sequenciamento Sanger para Uso Clínico

O sequenciamento por terminação de cadeia com didesoxi e a eletroforese capilar são explicados para identificação de variantes. Os alunos interpretam eletroferogramas e identificam mutações clinicamente significativas.

Aula 4 • Análise de Curva de Fusão e Alta Resolução

A análise de curva de fusão pós-PCR para genotipagem e varredura de mutações é detalhada. Os alunos distinguem alelos selvagens de mutantes usando perfis de temperatura de fusão.

Aula 1 • Estratégias de Enriquecimento Direcionado

Métodos de enriquecimento baseados em amplicon e captura por hibridização para sequenciamento focado são comparados. Os alunos desenham painéis direcionados a genes clinicamente acionáveis ou genomas de patógenos.

Aula 2 • Plataformas de Sequenciamento e Químicas

Illumina, Ion Torrent e plataformas de leitura longa são comparadas por química, tamanho de leitura e perfil de erro. Os alunos selecionam plataformas com base nos requisitos da aplicação clínica.

Aula 3 • Preparação de Biblioteca NGS

Fragmentação de DNA, reparo de extremidades, ligação de adaptadores e etapas de amplificação para construção de bibliotecas NGS são detalhados. A qualidade da biblioteca determina diretamente a profundidade do sequenciamento e a confiabilidade dos dados.

Aula 4 • Interpretação de Resultados Clínicos de NGS

Os arcabouços de classificação de variantes e os padrões de laudo para NGS clínico são aplicados. Os alunos distinguem variantes patogênicas de benignas usando critérios de classificação baseados em evidências.

Aula 1 • Genotipagem de Resistência Antimicrobiana

A detecção molecular de genes e mutações de resistência é ensinada para suporte rápido à decisão clínica. Os alunos identificam marcadores de MRSA, carbapenemase e resistência antiviral.

Aula 2 • Detecção de Patógenos Bacterianos

Métodos de PCR e sequenciamento para detecção direta e identificação de bactérias a partir de espécimes clínicos são abordados. Os alunos aplicam métodos moleculares onde a cultura é lenta ou impraticável.

Aula 3 • Ensaios de Carga Viral e Genotipagem

O teste quantitativo de carga viral e a genotipagem para HIV, HCV, HBV e CMV são detalhados. Os alunos usam dados de carga viral para orientar a terapia antiviral e monitorar a resposta ao tratamento.

Aula 4 • Painéis de Patógenos Respiratórios

Painéis multiplex sindrômicos para vírus respiratórios e bactérias atípicas são examinados. Os alunos interpretam os resultados do painel no contexto da apresentação clínica e da epidemiologia.

Aula 1 • Instabilidade de Microssatélites e Teste de MMR

O teste de MSI baseado em PCR e a correlação com IHC para deficiência de reparo de pareamento incorreto são detalhados. Os alunos aplicam o status de MSI à elegibilidade para imunoterapia e triagem de síndrome de Lynch.

Aula 2 • Detecção de Fusões Gênicas e Translocação

Métodos de FISH, RT-PCR e NGS para detecção de translocações cromossômicas e fusões gênicas são ensinados. Os alunos identificam fusões clinicamente acionáveis em tumores hematológicos e sólidos.

Aula 3 • Análise de Mutações Somáticas

A detecção de mutações somáticas em oncogenes e supressores tumorais usando PCR e NGS é abordada. Os alunos vinculam mutações específicas à elegibilidade para terapia alvo e prognóstico.

Aula 4 • Teste Molecular em Neoplasias Hematológicas

Marcadores moleculares para diagnóstico e monitoramento de leucemia, linfoma e mieloma são abordados. Os alunos aplicam ensaios de clonalidade e teste de MRD ao manejo de doenças hematológicas.

Aula 1 • Prevenção e Controle de Contaminação

As fontes de contaminação por amplicon e espécime em laboratórios moleculares são identificadas com estratégias de prevenção. Os alunos desenham controles físicos e processuais para eliminar resultados falso-positivos.

Aula 2 • Ensaio de Proficiência e QA Externo

Os programas externos de ensaio de proficiência e seu papel na acreditação laboratorial são explicados. Os alunos se inscrevem em programas de EP, analisam resultados e implementam ações corretivas.

Aula 3 • Desenho e Monitoramento do Controle de Qualidade

Materiais de CQ interno, gráficos de Levey-Jennings e regras de Westgard são aplicados ao monitoramento de ensaios moleculares. Os alunos detectam e respondem a falhas de CQ antes da liberação dos resultados dos pacientes.

Aula 4 • Conformidade Regulatória e Acreditação

Os padrões de acreditação laboratorial, qualificações de pessoal e requisitos de documentação para laboratórios moleculares são revisados. Os alunos se preparam para prontidão para inspeção e mantêm registros de conformidade.