Corso base sui sistemi di cromatografia

Lezione 1 • Principi fondamentali della separazione

Spiega il ripartimento, l'adsorbimento e la migrazione differenziale come base di tutte le separazioni. Collega questi meccanismi al comportamento cromatografico osservabile.

Lezione 2 • Allargamento di banda ed efficienza

Introduce l'equazione di van Deemter e la teoria dei piatti per spiegare l'ampiezza del picco. Collega le metriche di efficienza alle scelte pratiche di colonna e flusso.

Lezione 3 • Fasi stazionaria e mobile

Definisce i ruoli delle fasi stazionaria e mobile nel controllo della selettività. Introduce polarità, viscosità e compatibilità come criteri di selezione della fase.

Lezione 4 • Concetti di ritenzione e selettività

Quantifica il modo in cui gli analiti interagiscono con le fasi utilizzando fattori di ritenzione e rapporti di selettività. Costruisce il vocabolario necessario per le discussioni sullo sviluppo del metodo.

Lezione 1 • Acquisizione dati e controllo del sistema

Spiega la conversione analogico-digitale, i sistemi dati per cromatografia e il software di controllo dello strumento. Collega i segnali hardware ai cromatogrammi digitali.

Lezione 2 • Rivelatori e trasduzione del segnale

Esamina i rivelatori UV-Vis, a fluorescenza, a indice di rifrazione e a spettrometria di massa. Spiega come ciascun trasduttore converte la presenza dell'analita in un segnale elettrico.

Lezione 3 • Dispositivi di introduzione del campione

Descrive iniettori manuali, autocampionatori e campionatori headspace utilizzati per introdurre gli analiti. Collega il volume di iniezione e la tecnica alla riproducibilità.

Lezione 4 • Colonne e hardware della colonna

Esamina la geometria della colonna, i materiali di impaccamento e i raccordi che definiscono le prestazioni di separazione. Introduce le precolonne e le configurazioni di commutazione di colonna.

Lezione 1 • Risoluzione e qualità del picco in HPLC

Applica l'equazione di risoluzione per diagnosticare e migliorare la separazione dei picchi. Collega il numero di piatti, la selettività e la ritenzione a strategie pratiche di risoluzione.

Lezione 2 • Panoramica e modalità del sistema HPLC

Introduce HPLC a fase inversa, a fase normale e a scambio ionico come distinte strategie di separazione. Collega la polarità dell'analita e lo stato di ionizzazione alla selezione della modalità.

Lezione 3 • Composizione della fase mobile e gradienti

Tratta la forza del solvente, la selezione del tampone e la programmazione del gradiente per HPLC. Spiega come la forma del gradiente influisce sulla risoluzione e sul tempo di analisi.

Lezione 4 • Parametri e impostazione del metodo HPLC

Definisce portata, temperatura della colonna, volume di iniezione e lunghezza d'onda di rivelazione come parametri chiave dell'analisi. Dimostra la regolazione sistematica dei parametri per l'ottimizzazione del picco.

Lezione 1 • Rivelatori GC e loro selettività

Esamina i rivelatori FID, TCD, ECD, NPD e FPD con i loro profili di selettività e sensibilità. Abbina la scelta del rivelatore alla classe di analiti e ai requisiti normativi.

Lezione 2 • Programmazione della temperatura in GC

Spiega le analisi isoterme e a temperatura programmata e il loro effetto sull'ordine di eluizione. Dimostra l'ottimizzazione della velocità di rampa per miscele complesse.

Lezione 3 • Architettura del sistema GC

Mappa il percorso del flusso dall'erogazione del gas di trasporto attraverso l'iniettore, il forno della colonna e il rivelatore. Stabilisce come ciascun componente contribuisce alla qualità della separazione.

Lezione 4 • Tecniche di iniezione in GC

Confronta le modalità di iniezione split, splitless, on-column e a vaporizzazione a temperatura programmata. Collega la scelta dell'iniezione alla volatilità dell'analita, alla concentrazione e alla complessità della matrice.

Lezione 1 • Limiti di rivelazione e quantificazione

Definisce LOD e LOQ utilizzando gli approcci del rapporto segnale-rumore e della regressione. Applica questi limiti per valutare l'idoneità del metodo alle concentrazioni target degli analiti.

Lezione 2 • Strategie di identificazione dei picchi

Utilizza il tempo di ritenzione, la ritenzione relativa e il confronto spettrale per confermare l'identità dell'analita. Introduce la co-iniezione e l'aggiunta come strumenti di conferma.

Lezione 3 • Incertezza e presentazione dei risultati

Introduce la propagazione dell'incertezza di misura dalla calibrazione, dall'integrazione e dalla preparazione del campione. Guida la presentazione conforme dei risultati con le cifre significative appropriate.

Lezione 4 • Metodi e modelli di calibrazione

Confronta gli approcci di calibrazione con standard esterno, standard interno e aggiunta standard. Spiega quando ciascun modello è appropriato in base alla matrice e alla variabilità dello strumento.

Lezione 1 • Strategie di ottimizzazione dei parametri

Applica l'ottimizzazione univariata e multivariata per perfezionare portata, temperatura e gradiente. Bilancia i compromessi tra risoluzione, tempo di analisi e sensibilità.

Lezione 2 • Definire gli obiettivi del metodo e le proprietà degli analiti

Stabilisce gli analiti target, gli intervalli di concentrazione, i tipi di matrice e i requisiti normativi prima della selezione della colonna. Previene costose rilavorazioni allineando gli obiettivi con le capacità della tecnica.

Lezione 3 • Documentazione e trasferimento del metodo

Struttura i documenti del metodo con dettagli sufficienti per un trasferimento efficace ad un altro laboratorio. Tratta i criteri di idoneità del sistema e i criteri di accettazione del trasferimento.

Lezione 4 • Verifica della robustezza e della ruggedness

Valuta le prestazioni del metodo in caso di deliberate piccole variazioni dei parametri critici. Identifica i limiti di controllo che proteggono le prestazioni del metodo durante l'uso di routine.

Lezione 1 • Quadro di validazione e terminologia

Definisce i parametri di validazione—specificità, linearità, accuratezza, precisione, intervallo e robustezza—in un contesto normativo. Stabilisce il piano di validazione come documento governante.

Lezione 2 • Rapporto di validazione e gestione del ciclo di vita

Compila i dati di validazione in un rapporto strutturato con conclusioni e pronto per la presentazione normativa. Introduce il controllo delle modifiche post-approvazione e i fattori scatenanti per la rivalidazione.

Lezione 3 • Precisione: ripetibilità e riproducibilità

Misura la ripetibilità intra-giorno e la precisione intermedia inter-giorno utilizzando iniezioni replicate. Applica i criteri di %RSD per confermare prestazioni coerenti del metodo.

Lezione 4 • Linearità, intervallo e accuratezza

Stabilisce l'intervallo di lavoro con l'analisi di regressione e valuta l'accuratezza attraverso esperimenti di recupero. Collega questi parametri all'intervallo di concentrazione previsto per il metodo.

Lezione 1 • Problemi di linea di base e rumore

Identifica le fonti di deriva della linea di base, picchi e rumore elevato nei rivelatori e nei sistemi elettronici. Guida le azioni correttive, dal degasaggio della fase mobile alla pulizia del rivelatore.

Lezione 2 • Approccio sistematico alla risoluzione dei problemi

Introduce un flusso di lavoro strutturato per l'isolamento del guasto, dall'osservazione del sintomo alla conferma della causa principale. Previene diagnosi errate separando le variabili dello strumento, della colonna e del metodo.

Lezione 3 • Anomalie di pressione e flusso

Diagnostica alta pressione, bassa pressione e instabilità del flusso da guasti di pompa, colonna e connessioni. Fornisce procedure di isolamento dettagliate per ogni scenario di pressione.

Lezione 4 • Problemi comuni di forma del picco

Diagnostica picchi con scodamento, fronting, sdoppiamento e picchi fantasma utilizzando evidenze cromatografiche. Collega ogni difetto a specifiche cause hardware, di colonna o di metodo.