Corso di cromatografia

Lezione 1 • I componenti del sistema cromatografico

Identifica fase stazionaria, fase mobile, iniettore, colonna e rivelatore come i cinque componenti fondamentali. Spiega come ciascun componente influenzi la qualità della separazione.

Lezione 2 • Storia e ambito della cromatografia

Traccia la cromatografia dal lavoro di Tswett sui pigmenti vegetali fino alle moderne tecniche ibride. Contestualizza perché la scienza delle separazioni è centrale per la chimica analitica.

Lezione 3 • Allargamento di banda e teoria dei piatti

Spiega i piatti teorici, l'HETP e l'equazione di van Deemter come metriche di efficienza. Collega ciascun termine di allargamento alle variabili operative pratiche.

Lezione 4 • Concetti di ritenzione e selettività

Introduce tempo di ritenzione, fattore di ritenzione e fattore di selettività come descrittori quantitativi. Dimostra come la regolazione della chimica di fase modifichi la selettività.

Lezione 1 • Preparazione della lastra TLC e deposizione del campione

Tratta la selezione di lastre commerciali, la preparazione del campione e la corretta tecnica di deposizione. Una deposizione corretta determina direttamente la qualità della macchia e la riproducibilità dell'Rf.

Lezione 2 • Principi della cromatografia planare

Definisce la migrazione della fase mobile guidata dalla capillarità su fasi stazionarie piane. Distingue TLC dalla cromatografia su carta per sorbente e meccanismo.

Lezione 3 • Selezione della fase mobile per TLC

Applica la serie eluotropica e l'abbinamento di polarità per scegliere sistemi solventi efficaci. L'ottimizzazione sistematica del solvente riduce il tempo di sviluppo per tentativi.

Lezione 4 • Tecniche di TLC ad alta prestazione

Introduce lastre HPTLC, deposizione automatizzata e scansione densitometrica per lavori quantitativi. L'HPTLC fa da ponte tra TLC qualitativa e metodi strumentali quantitativi.

Lezione 1 • Rivelatori GC e loro selettività

Confronta rivelatori FID, TCD, ECD, NPD e FPD per sensibilità, selettività e linearità. La scelta del rivelatore è abbinata alla classe dell'analita e ai limiti di rivelazione richiesti.

Lezione 2 • Colonne e fasi stazionarie per GC

Classifica colonne impaccate e capillari per polarità, spessore del film e diametro interno. La selezione della colonna determina la selettività ed è la variabile primaria nello sviluppo del metodo.

Lezione 3 • Tecniche di iniezione in GC

Confronta le modalità di iniezione split, splitless, on-column e PTV per diversi tipi di campione. La scelta della modalità di iniezione controlla la discriminazione, gli artefatti da discriminazione e i limiti di rivelazione.

Lezione 4 • Programmazione della temperatura in GC

Spiega le analisi isoterme rispetto a quelle a temperatura programmata e il loro effetto su risoluzione e tempo di analisi. Programmi di temperatura ottimizzati separano in modo efficiente miscele ad ampio intervallo di ebollizione.

Lezione 1 • Scambio ionico e cromatografia ionica

Spiega la ritenzione a scambio cationico e anionico e la rivelazione a conducibilità soppressa per gli ioni. La cromatografia ionica consente la quantificazione simultanea di ioni inorganici e organici.

Lezione 2 • Fondamenti di HPLC in fase inversa

Stabilisce la ritenzione in fase inversa su silice legata con alchili utilizzando fasi mobili acquoso-organiche. L'RP-HPLC è la modalità dominante e il punto di riferimento per tutte le altre modalità HPLC.

Lezione 3 • Componenti del sistema HPLC e percorso del flusso

Descrive pompa, degassatore, autocampionatore, compartimento colonna e rivelatore come il percorso di flusso HPLC. La specifica prestazionale di ciascun componente limita direttamente l'accuratezza complessiva del sistema.

Lezione 4 • Modalità in fase normale e HILIC

Contrappone la ritenzione in fase normale su sorbenti polari con la ritenzione HILIC per analiti idrofili. HILIC colma la lacuna per i composti polari scarsamente ritenuti nei sistemi in fase inversa.

Lezione 1 • Definizione dei requisiti del metodo

Traduce gli obiettivi analitici in target prestazionali misurabili prima che inizi la sperimentazione. Requisiti chiari prevengono la sovra-ingegnerizzazione e guidano uno sviluppo efficiente.

Lezione 2 • Preparazione del campione per cromatografia

Tratta le tecniche di estrazione, purificazione e concentrazione che precedono l'iniezione cromatografica. Una preparazione adeguata del campione determina la sensibilità del metodo e la compatibilità con la matrice.

Lezione 3 • Strategia sistematica di sviluppo del metodo

Applica approcci di design of experiments e una variabile alla volta per ottimizzare le condizioni cromatografiche. Strategie strutturate riducono i tempi di sviluppo e migliorano la robustezza.

Lezione 4 • Test di robustezza e trasferimento

Utilizza i disegni di Plackett-Burman per identificare i parametri critici del metodo e impostare limiti operativi. I protocolli di trasferimento del metodo assicurano prestazioni equivalenti tra laboratori e strumenti.

Lezione 1 • Spettrometria di massa tandem in cromatografia

Spiega le modalità di scansione a ione prodotto, ione precursore e MRM per la conferma strutturale e la quantificazione. MRM è il gold standard per la quantificazione in tracce in matrici biologiche e ambientali complesse.

Lezione 2 • Progettazione di metodi MS quantitativi

Applica la selezione dello standard interno, la calibrazione a matrice e la diluizione isotopica per ottenere una quantificazione accurata. Una progettazione quantitativa adeguata compensa gli effetti matrice e la variabilità strumentale.

Lezione 3 • Fondamenti di spettrometria di massa per cromatografisti

Introduce ionizzazione, analisi di massa e rivelazione come i tre stadi MS pertinenti ai metodi ifenati. La comprensione dei fondamenti MS è prerequisito per interpretare i dati cromatografici MS.

Lezione 4 • Ionizzazione GC-MS e interpretazione spettrale

Tratta le modalità di ionizzazione elettronica e ionizzazione chimica e i loro pattern di frammentazione risultanti. Le competenze di interpretazione spettrale consentono l'identificazione dei composti tramite confronto con librerie e analisi manuale.

Lezione 1 • Proteina A e purificazione di anticorpi

Spiega la selettività del ligando Proteina A per le regioni Fc delle IgG e il suo ruolo nella purificazione di anticorpi monoclonali. La cromatografia con Proteina A è la fase di cattura di piattaforma nella produzione biofarmaceutica.

Lezione 2 • Selezione e operatività della colonna SEC

Confronta terreni SEC a base di destrano, agarosio e silice per scala analitica e preparativa. La selezione della colonna bilancia risoluzione, tolleranza alla pressione e compatibilità con le molecole target.

Lezione 3 • Fondamenti della cromatografia di affinità

Definisce l'interazione biospecifica ligando-target come base della ritenzione ed eluizione per affinità. La cromatografia di affinità raggiunge fattori di purificazione non ottenibili con altri metodi a singolo stadio.

Lezione 4 • Principi della cromatografia a esclusione dimensionale

Spiega la distribuzione della dimensione dei pori, il limite di esclusione e la permeazione come base della separazione SEC. La SEC separa senza interazione chimica, rendendola ideale per l'analisi di proteine native.

Lezione 1 • Cromatografia a fluido supercritico

Descrive fasi mobili a base di CO₂, aggiunta di modificatore e regolazione della contropressione nei sistemi SFC. La SFC eccelle nelle separazioni chirali e offre selettività ortogonale all'HPLC in fase inversa.

Lezione 2 • Cromatografia liquida a ultra-alta prestazione

Spiega le particelle sub-2-micron, il funzionamento a pressione elevata e la dispersione ridotta nei sistemi UHPLC. UHPLC offre analisi più rapide e risoluzione più elevata rispetto all'HPLC convenzionale.

Lezione 3 • Elettrocromatografia capillare e microfluidica

Tratta separazioni guidate da flusso elettrosmotico in capillari impaccati e formati su chip. I formati miniaturizzati riducono il consumo di solvente e consentono applicazioni di screening ad alta produttività.

Lezione 4 • Principi della cromatografia chirale

Spiega il modello di interazione a tre punti e i tipi di fase stazionaria chirale per la risoluzione di enantiomeri. Le separazioni chirali sono critiche per la purezza farmaceutica e la caratterizzazione stereochimica.