Corso di Cromatografia a Esclusione Molecolare

Lezione 1 • Principi della Separazione Cromatografica

Tratta le interazioni tra fase stazionaria e fase mobile e i fondamenti dell'allargamento di banda. Stabilisce la terminologia utilizzata nell'intero corso.

Lezione 2 • Basi Fisiche dell'Esclusione Dimensionale

Illustra l'esclusione sterica e la diffusione nei pori come unico meccanismo di separazione. Collega la geometria dei pori alla discriminazione basata sulla dimensione molecolare.

Lezione 3 • Terminologia e Parametri Chiave della SEC

Definisce il volume morto, il volume di eluizione e il coefficiente di distribuzione Kd. Fornisce il linguaggio quantitativo necessario per tutti i capitoli successivi.

Lezione 1 • Cura della Colonna e Durata

Tratta la conservazione, la rigenerazione e il monitoraggio delle prestazioni per massimizzare la durata della colonna. Ha un impatto diretto sulla riproducibilità dei dati e sull'efficienza dei costi.

Lezione 2 • Dimensione dei Pori e Intervallo di Frazionamento

Illustra come la dimensione nominale dei pori determini la finestra di frazionamento del peso molecolare. Guida la selezione della colonna per proteine, polimeri e piccole molecole.

Lezione 3 • Chimica delle Particelle Porose

Esamina i supporti a base di silice, destrano reticolato, agarosio e polimeri sintetici. Collega la chimica alla compatibilità chimica e all'intervallo operativo.

Lezione 1 • Preparazione del Campione per SEC

Tratta la filtrazione, lo scambio del tampone e le fasi di concentrazione prima dell'iniezione. Previene la contaminazione della colonna e garantisce dati accurati sul peso molecolare.

Lezione 2 • Ottimizzazione della Portata e della Pressione

Mette in relazione la portata con la risoluzione tramite l'equazione di van Deemter adattata alla SEC. Bilancia il tempo di analisi con l'efficienza del picco.

Lezione 3 • Effetti della Temperatura sulla SEC

Descrive come la temperatura alteri la viscosità, la diffusione e le interazioni secondarie. Guida la selezione della temperatura per separazioni riproducibili.

Lezione 4 • Principi di Composizione della Fase Mobile

Illustra come la forza ionica, il pH e i modificatori organici sopprimano le interazioni aspecifiche. Stabilisce i criteri per la scelta tra solventi SEC acquosi e organici.

Lezione 1 • Rivelazione dell'Assorbanza UV-Vis

Illustra la selezione della lunghezza d'onda, la linearità del rivelatore e la stabilità della linea di base per la rivelazione UV. Tratta la rivelazione delle proteine a 280 nm e degli acidi nucleici a 260 nm.

Lezione 2 • Architetture dei Sistemi HPLC e FPLC

Confronta le piattaforme di cromatografia liquida ad alta e bassa pressione utilizzate per la SEC. Guida la scelta dello strumento in base a pressione, scala e tipo di campione.

Lezione 3 • Pompe, Iniettori e Tubazioni

Descrive in dettaglio i tipi di pompa, il funzionamento della valvola di iniezione e il volume morto delle tubazioni. Minimizza l'allargamento di banda extra-colonna per risultati accurati.

Lezione 4 • Accoppiamento con Viscosimetria e Spettrometria di Massa

Tratta la viscosimetria in linea per la viscosità intrinseca e l'accoppiamento SEC-MS per la conferma dell'identità. Espande le informazioni analitiche ottenibili da una singola seduta analitica SEC.

Lezione 1 • Medie del Peso Molecolare e Dispersità

Calcola Mn, Mw, Mz e l'indice di dispersità Ð dai dati cromatografici. Collega le statistiche di distribuzione alle proprietà del materiale e alla qualità del prodotto.

Lezione 2 • Calibrazione Relativa con Standard

Utilizza standard a distribuzione stretta per costruire una curva di log PM rispetto al volume di eluizione. Stabilisce l'approccio di calibrazione più comune nell'analisi di polimeri e proteine.

Lezione 3 • Peso Molecolare Assoluto con MALS

Deriva il PM assoluto direttamente dalla diffusione luminosa senza standard di calibrazione. Elimina i bias legati alla chimica della colonna per macromolecole complesse.

Lezione 4 • Validazione dei Metodi di Calibrazione

Applica i criteri di accuratezza analitica, precisione analitica, linearità analitica e intervallo alla validazione della calibrazione. Garantisce l'integrità dei dati per ambienti regolamentati e di ricerca.

Lezione 1 • Ottimizzazione del Volume di Iniezione e del Carico del Campione

Determina il volume di iniezione e il carico di massa massimi prima che la risoluzione si degradi. Previene gli artefatti da sovraccarico sia nella SEC analitica che in quella preparativa.

Lezione 2 • Definizione degli Obiettivi e dei Requisiti del Metodo

Traduce gli obiettivi analitici in criteri misurabili di prestazione del metodo. Allinea le scelte di colonna, fase mobile e rivelatore con l'uso previsto.

Lezione 3 • Strategie per il Miglioramento della Risoluzione

Applica l'accoppiamento di colonne, la regolazione della portata e la messa a punto della temperatura per migliorare la risoluzione. Fornisce strumenti pratici per separazioni difficili.

Lezione 4 • Test di Robustezza e Ruggedness del Metodo

Valuta la sensibilità del metodo a piccole variazioni deliberate dei parametri chiave. Identifica i parametri critici e stabilisce intervalli operativi accettabili.

Lezione 1 • Analisi dell'Aggregazione Proteica

Utilizza la SEC per quantificare il contenuto di monomero, dimero e aggregati di ordine superiore nei campioni proteici. Supporta direttamente la valutazione della qualità del principio attivo farmaceutico.

Lezione 2 • Studi di Formulazione e Stabilità

Monitora l'aggregazione e la frammentazione durante studi di stabilità accelerata e in tempo reale. Collega i dati SEC alle decisioni sulla formulazione e alle previsioni di shelf-life.

Lezione 3 • Analisi di Acidi Nucleici e Oligonucleotidi

Adatta le condizioni SEC per il profilo dimensionale di DNA, RNA e oligonucleotidi. Affronta i requisiti specifici di fase mobile e colonna per gli acidi nucleici.

Lezione 4 • Caratterizzazione degli Anticorpi Monoclonali

Applica la SEC per valutare le varianti dimensionali dei mAb, i frammenti e l'integrità dei coniugati. Tratta le condizioni del metodo specifiche per le IgG e i coniugati anticorpo-farmaco.

Lezione 1 • Redazione di Relazioni Tecniche per SEC

Struttura i referti SEC con sezioni di metodi, risultati, discussione e conclusioni. Comunica i risultati in modo chiaro a interlocutori scientifici e non scientifici.

Lezione 2 • Integrità dei Dati e Registrazioni Elettroniche

Applica i principi di audit trail, controllo degli accessi e revisione dei dati ai sistemi software SEC. Soddisfa le aspettative dei quadri di integrità dei dati nelle industrie regolamentate.

Lezione 3 • Interpretazione dei Cromatogrammi e Integrazione dei Picchi

Applica la correzione della linea di base, il rilevamento dei picchi e gli algoritmi di integrazione ai cromatogrammi SEC. Garantisce calcoli accurati dell'area percentuale e del peso molecolare.

Lezione 4 • Validazione del Metodo per Ambienti Regolamentati

Esegue i parametri di validazione inclusi specificità, linearità analitica, accuratezza analitica e precisione analitica. Prepara la documentazione per la sottomissione normativa e la preparazione agli audit.