Corso sull'esecuzione di test PCR

Lezione 1 • Smaltimento dei Rifiuti Chimici e Biologici

Tratta la separazione, l'etichettatura e lo smaltimento dei reagenti per PCR e dei campioni biologici. Collega la corretta gestione dei rifiuti alla conformità normativa e alla protezione ambientale.

Lezione 2 • Protocolli per i Dispositivi di Protezione Individuale

Descrive in dettaglio le procedure corrette per indossare, rimuovere e smaltire guanti, camici, mascherine e protezioni oculari. Rafforza la prevenzione della contaminazione come prerequisito per risultati PCR validi.

Lezione 3 • Livelli di Biosicurezza e Classificazione del Rischio

Definisce i livelli di biosicurezza e associa i gruppi di rischio dei patogeni ai requisiti di contenimento appropriati. Fornisce le basi di sicurezza per tutte le successive attività di laboratorio.

Lezione 1 • Reagenti Chiave e Loro Ruoli

Identifica i componenti essenziali della PCR, inclusi la DNA polimerasi, i primer, i dNTPs e il tampone. Lo studente apprende come ciascun reagente contribuisca alla fedeltà e alla resa della reazione.

Lezione 2 • Panoramica sulle Varianti e le Applicazioni della PCR

Esamina i principali formati di PCR, tra cui RT-PCR, qPCR e PCR multiplex. Colloca ciascuna variante nel suo contesto diagnostico o di ricerca per i capitoli successivi.

Lezione 3 • Fondamenti di Struttura e Replicazione del DNA

Tratta la composizione dei nucleotidi, l'appaiamento delle basi e il modello a doppia elica come prerequisiti per la logica della PCR. Stabilisce il vocabolario molecolare utilizzato in tutto il capitolo.

Lezione 1 • Accettazione del Campione e Trattamento Pre-Analitico

Descrive in dettaglio le procedure di accettazione in laboratorio, tra cui l'ispezione visiva, i criteri di rifiuto e l'accettazione. Collega le fasi pre-analitiche alla qualità dell'estrazione e dell'amplificazione a valle.

Lezione 2 • Trasporto del Campione Biologico e Catena del Freddo

Tratta i requisiti di temperatura, gli standard di imballaggio e i tempi di trasporto per i campioni da PCR. Mantiene la qualità pre-analitica che influisce direttamente sulle prestazioni di amplificazione a valle.

Lezione 3 • Tipi di Campione e Siti di Raccolta

Descrive i campioni nasofaringei, orofaringei, salivari e altri tipi di campione biologico utilizzati nella diagnostica PCR. Spiega come il sito di raccolta influenzi la carica virale e l'accuratezza analitica del risultato.

Lezione 1 • Valutazione della Qualità degli Acidi Nucleici

Insegna la quantificazione spettrofotometrica e fluorometrica degli acidi nucleici estratti. Le metriche di qualità guidano le decisioni di diluizione e prevedono l'efficienza di amplificazione della PCR.

Lezione 2 • Principi dell'Estrazione degli Acidi Nucleici

Spiega la lisi cellulare, il legame degli acidi nucleici, il lavaggio e l'eluizione come fasi universali dell'estrazione. Stabilisce il quadro concettuale applicato a tutti i metodi manuali e automatizzati.

Lezione 3 • Risoluzione dei Problemi nell'Estrazione

Identifica i fallimenti comuni dell'estrazione, tra cui bassa resa, degradazione e inibizione. Una risoluzione sistematica dei problemi ripristina le prestazioni di estrazione e protegge la validità del risultato.

Lezione 4 • Piattaforme di Estrazione Automatizzate

Introduce gli estrattori automatizzati ad alta processività, la loro programmazione e i requisiti di manutenzione. L'automazione riduce l'errore manuale e aumenta la processività per i test PCR ad alto volume.

Lezione 1 • Programmazione e Funzionamento del Termociclatore

Spiega in dettaglio come programmare i parametri del ciclo, inclusi temperatura, tempo e velocità di rampa. Una programmazione corretta determina direttamente l'efficienza di amplificazione e la specificità del prodotto.

Lezione 2 • Preparazione dei Componenti di Reazione

Tratta lo scongelamento, il vortex e la centrifugazione dei reagenti prima dell'assemblaggio della miscela master. Una preparazione corretta previene errori di pipettamento e garantisce condizioni di reazione costanti.

Lezione 3 • Tecniche di Caricamento di Piastre e Provette

Tratta il layout sistematico del campione, il posizionamento dei controlli positivi e negativi e i metodi di sigillatura. Un caricamento organizzato previene la contaminazione crociata e supporta un'interpretazione accurata dei dati.

Lezione 4 • Monitoraggio e Completamento della Seduta Analitica

Insegna il monitoraggio in tempo reale delle curve di amplificazione e degli alert dello strumento durante la seduta. Un intervento tempestivo durante la seduta previene lo spreco di reagenti e risultati non validi.

Lezione 1 • Comprendere i Valori di Ct e le Curve di Amplificazione

Spiega i valori di ciclo soglia, le fasi della curva sigmoide e la loro relazione con la quantità di bersaglio. L'interpretazione del Ct è la competenza primaria per determinare risultati positivi, negativi e indeterminati.

Lezione 2 • Generazione del Referto e Comunicazione del Risultato

Insegna la formattazione strutturata del referto, la codifica del risultato e la trasmissione sicura ai medici richiedenti. Una refertazione accurata chiude il ciclo diagnostico e supporta il processo decisionale clinico.

Lezione 3 • Valutazione delle Prestazioni dei Controlli

Tratta l'interpretazione dei controlli positivi, negativi e dei controlli interni di estrazione all'interno di ciascuna seduta. I fallimenti dei controlli invalidano la seduta analitica e innescano flussi di lavoro di azioni correttive definiti.

Lezione 4 • Determinazioni Positive, Negative e Indeterminate

Definisce le categorie di risultato utilizzando criteri di cut-off specifici del saggio e le prestazioni dei controlli. Lo studente applica le regole decisionali coerentemente per minimizzare gli errori di errata classificazione.

Lezione 1 • Non Conformità e Analisi delle Cause Profonde

Tratta l'identificazione, la documentazione e la risoluzione degli eventi non conformi nei test PCR. L'analisi delle cause profonde previene le recidive e dimostra un miglioramento continuo agli enti accreditanti.

Lezione 2 • Progettare un Piano di CQ per la PCR

Guida lo studente nella scelta dei materiali di controllo, nella definizione dei criteri di accettazione e nella programmazione delle sedute di CQ. Un piano di CQ strutturato rileva gli errori sistematici prima che influenzino i risultati del paziente.

Lezione 3 • Grafici di Levey-Jennings e Analisi dei Trend

Insegna la costruzione e l'interpretazione dei grafici di Levey-Jennings per rilevare shift e trend. L'analisi visiva dei trend consente il rilevamento precoce del degrado dei reagenti o della deriva dello strumento.

Lezione 4 • Fondamenti del Controllo di Qualità

Definisce accuratezza analitica, precisione analitica, sensibilità analitica e specificità analitica come metriche fondamentali del CQ per i saggi PCR. Queste metriche costituiscono la base per valutare le prestazioni del saggio in tutte le successive attività di CQ.

Lezione 1 • Validazione e Verifica del Saggio

Tratta i parametri di validazione del metodo, tra cui accuratezza analitica, precisione analitica e test di interferenza. I dati di validazione dimostrano l'idoneità del saggio per l'uso clinico e soddisfano i requisiti normativi per la presentazione.

Lezione 2 • Ottimizzazione della PCR Quantitativa Real-Time

Tratta la costruzione della curva standard, il calcolo dell'efficienza e la valutazione dell'intervallo dinamico per la qPCR. Una qPCR ottimizzata fornisce una quantificazione accurata, essenziale per il monitoraggio della carica virale.

Lezione 3 • Quadro Sistematico per la Risoluzione dei Problemi della PCR

Fornisce un approccio strutturato per diagnosticare falsi positivi, falsi negativi e inibizione. Una risoluzione sistematica dei problemi riduce il tempo alla risoluzione e protegge l'accuratezza diagnostica.

Lezione 4 • Principi e Applicazioni della PCR Digitale

Introduce la PCR digitale a gocce e su chip per la quantificazione assoluta senza curva standard. La PCR digitale si applica a bersagli a bassa abbondanza e al rilevamento di varianti rare.