Curso de Centrifugação

Aula 1 • Princípios de Sedimentação

Explica a lei de Stokes, os coeficientes de sedimentação e o comportamento das partículas num campo centrífugo. Relaciona o tamanho, a densidade e a viscosidade das partículas com a eficiência da separação.

Aula 2 • Física da Força Centrífuga

Aborda a força centrífuga e centrípeta, a velocidade angular e a força centrífuga relativa (RCF). Estabelece as leis físicas que regem todo o funcionamento das centrífugas.

Aula 3 • Relações de Flutuação e Densidade

Apresenta a densidade de flutuação, a densidade efetiva das partículas e a flotação. Explica como as diferenças de densidade entre as partículas e o meio impulsionam a separação.

Aula 1 • Sistemas de Temperatura e Vácuo

Descreve as unidades de refrigeração, os sensores de temperatura e as câmaras de vácuo em ultracentrífugas. Explica como o controlo térmico preserva as amostras biológicas e químicas.

Aula 2 • Conceção e Seleção de Rotores

Aborda rotores de ângulo fixo, de baldes oscilantes, verticais e quase verticais. Os alunos aprendem como a geometria do rotor afeta o percurso de sedimentação e o tempo de funcionamento.

Aula 3 • Tubos, Garrafas e Adaptadores

Analisa os materiais dos tubos de centrífuga, as gamas de volume e os tipos de fecho. Relaciona a seleção do recipiente com a compatibilidade química e a tolerância máxima à RCF.

Aula 4 • Sistemas de Acionamento e Controlo de Velocidade

Explica os tipos de motores, os acionamentos sem escovas e a regulação eletrónica da velocidade. Demonstra como os perfis de aceleração e desaceleração afetam a integridade da amostra.

Aula 1 • Estruturas de Conformidade Regulamentar

Aborda as normas de saúde ocupacional, segurança laboratorial e certificação de equipamentos aplicáveis a centrífugas. Prepara os alunos para auditar a conformidade nas suas instalações.

Aula 2 • Biossegurança e Níveis de Contenção

Aplica os requisitos do nível de biossegurança à utilização da centrífuga com agentes infeciosos. Aborda rotores selados, câmaras de segurança biológica e procedimentos de descontaminação.

Aula 3 • Equipamento de Proteção Individual

Especifica a seleção de EPI para diferentes cenários de centrifugação, incluindo materiais infeciosos e perigosos. Relaciona a escolha do EPI com o nível de perigo e a orientação regulamentar.

Aula 4 • Procedimentos de Resposta a Emergências

Define respostas passo a passo para falha do rotor, rutura de tubos e derrames perigosos dentro da centrífuga. Reduz os danos através de uma ação sistemática e praticada.

Aula 1 • Procedimentos de Carregamento e Descarregamento

Detalha as sequências seguras de carregamento do rotor, o aperto da tampa e o descarregamento pós-corrida para preservar sedimentos e gradientes. A disciplina processual previne a perda e contaminação de amostras.

Aula 2 • Equilibrar Rotores com Precisão

Ensina métodos de equilíbrio gravimétrico e volumétrico para todos os tipos de rotor. O desequilíbrio é a principal causa de tensão no rotor e danos no instrumento.

Aula 3 • Enchimento de Tubos e Controlo de Volume

Especifica os volumes de enchimento para diferentes tipos de tubo e rotor para evitar colapso ou transbordo. O enchimento correto é essencial tanto para a segurança como para a qualidade da separação.

Aula 4 • Seleção de Tampão e Meio

Explica como a composição do tampão, o pH, a força iónica e a osmolaridade afetam a integridade das partículas. Orienta os alunos na escolha de meios que preservam a função da amostra.

Aula 1 • Fluxos de Trabalho de Fracionamento Subcelular

Apresenta protocolos padrão para isolar núcleos, mitocôndrias, microssomas e citosol. Os alunos mapeiam cada fração para a sua origem biológica e marcador esperado.

Aula 2 • Princípios da Sedimentação Diferencial

Explica a lógica da sedimentação sequencial, a composição do sedimento e o arrastamento do sobrenadante. Estabelece a base conceptual para todos os fluxos de trabalho de fracionamento diferencial.

Aula 3 • Otimização dos Parâmetros de Velocidade e Tempo

Orienta a seleção de parâmetros usando coeficientes de sedimentação e cálculos do fator k. A otimização reduz o tempo de funcionamento mantendo a pureza da fração.

Aula 1 • Centrifugação Zonal por Taxa

Aplica a sedimentação dependente do tempo para separar partículas por tamanho dentro de um gradiente estabilizador. Os alunos calculam as condições de funcionamento para posicionar as bandas nos locais desejados.

Aula 2 • Técnicas de Formação de Gradientes

Aborda os métodos de preparação de gradientes em degrau, lineares e contínuos, incluindo formadores de gradiente. A forma do gradiente controla diretamente a resolução e o tempo de separação.

Aula 3 • Fracionamento e Análise de Gradientes

Descreve os métodos de deslocamento ascendente, punção do tubo e recolha com recolhedor de frações para a colheita do gradiente. A análise das frações confirma a identidade e pureza das bandas.

Aula 4 • Centrifugação Isopícnica

Utiliza o bandeamento de equilíbrio na densidade de flutuação para separar partículas independentemente do tamanho. Aborda gradientes de equilíbrio de CsCl para isolamento de ADN e ARN.

Aula 1 • Fracionamento de Lipoproteínas e Membranas

Utiliza ultracentrifugação sequencial e ajuste de densidade com KBr para isolar classes de lipoproteínas. O isolamento de frações de membrana apoia a proteómica e a análise de lípidos.

Aula 2 • Essenciais da Operação da Ultracentrífuga

Aborda o arranque do sistema de vácuo, instalação do rotor e programação de parâmetros de funcionamento para ultracentrífugas. A operação correta previne a falha catastrófica do rotor a velocidades extremas.

Aula 3 • Isolamento de Exossomas e Vesículas

Apresenta protocolos de ultracentrifugação diferencial e de almofada para o isolamento de vesículas extracelulares. Os alunos obtêm sedimentos de exossomas reprodutíveis a partir de fluidos biológicos.

Aula 4 • Purificação de Vírus e Vetores Virais

Aplica gradientes em degrau de iodixanol e bandeamento em CsCl para purificar partículas virais para investigação e terapia genética. Os requisitos de título e pureza orientam a conceção do protocolo.

Aula 1 • Cuidados e Inspeção do Rotor

Aborda a limpeza do rotor, deteção de corrosão, identificação de fissuras por tensão e critérios de reforma. A integridade do rotor é o fator de segurança mais crítico na centrifugação.

Aula 2 • Planos de Manutenção Preventiva

Define as tarefas de manutenção diárias, semanais, mensais e anuais para rotores, câmaras e sistemas de acionamento. A manutenção programada prolonga a vida útil do instrumento e previne tempos de paragem não planeados.

Aula 3 • Calibração e Verificação de Desempenho

Descreve os procedimentos de calibração de velocidade, temperatura e temporizador usando padrões rastreáveis. O desempenho verificado garante a reprodutibilidade dos dados e a conformidade regulamentar.

Aula 4 • Garantia de Qualidade e Documentação

Estabelece práticas de diário de bordo, relato de desvios e protocolos de qualificação de instrumentos. A documentação robusta apoia auditorias, reprodutibilidade e melhoria contínua.