Curso de Microscopista

Aula 1 • Tipos de Microscópios

Aborda microscópios de luz, eletrónicos e de sonda de varrimento. Relaciona a escolha do instrumento com o tipo de amostra e o objetivo da investigação.

Aula 2 • Segurança Laboratorial e Regulamentação

Aborda os riscos químicos, biológicos e elétricos no laboratório de microscopia. O cumprimento das normas de segurança protege o pessoal e o equipamento.

Aula 3 • Componentes e Ótica do Microscópio

Identifica os componentes mecânicos e óticos de um microscópio composto. Compreender cada peça permite uma configuração e resolução de problemas corretas.

Aula 4 • História e Princípios da Microscopia

Traça a evolução da microscopia desde as primeiras descobertas óticas até aos instrumentos modernos. Estabelece a base conceptual para compreender como funcionam a ampliação e a resolução.

Aula 1 • Preparação de Montagem Húmida e Montagem Seca

Demonstra a montagem de amostras vivas e fixas em lâminas de vidro. O método de montagem afeta a viabilidade, a clareza e a longevidade da amostra.

Aula 2 • Preparação de Amostras para Microscopia Eletrónica

Detalha a desidratação, a inclusão em resina e a pulverização catódica para microscopia eletrónica. Estes passos são essenciais para obter amostras compatíveis com vácuo e de alto contraste.

Aula 3 • Coloração e Aumento de Contraste

Apresenta protocolos de coloração histológica, citoquímica e negativa. A coloração revela detalhes estruturais invisíveis em amostras não coradas.

Aula 4 • Métodos de Fixação e Preservação

Explica a fixação química e física para preservar a estrutura da amostra. A fixação correta previne artefactos que distorcem as imagens microscópicas.

Aula 1 • Fundamentos de Imagem Digital

Aborda pixels, profundidade de bits, gama dinâmica e ruído do sensor em imagiologia científica. Estes parâmetros determinam a exatidão de todas as medições quantitativas subsequentes.

Aula 2 • Formatos de Ficheiro de Imagem e Metadados

Explica os formatos TIFF, OME-TIFF e proprietários, juntamente com os metadados incorporados. Preservar os metadados garante a reprodutibilidade e a calibração precisa da escala.

Aula 3 • Análise Quantitativa de Imagem

Aborda a medição de intensidade, a contagem de objetos e a análise morfométrica. Os resultados quantitativos transformam imagens em dados biológicos estatisticamente testáveis.

Aula 4 • Fluxos de Trabalho de Software de Análise de Imagem

Apresenta plataformas de código aberto e comerciais para análise de imagem em lote. Os pipelines automatizados aumentam o débito e reduzem a variabilidade dependente do operador.

Aula 1 • Captura e Processamento Básico de Imagem

Orienta as definições da câmara, exposição e balanço de brancos para captura digital. Os passos básicos de processamento melhoram a clareza sem introduzir alterações enganadoras.

Aula 2 • Noções Básicas de Imagiologia de Células Vivas

Apresenta câmaras ambientais e protocolos de time-lapse para amostras vivas. Manter a viabilidade celular durante a imagiologia requer temperatura e CO2 controlados.

Aula 3 • Técnicas de Imagiologia de Campo Claro

Aborda foco, contraste e seleção de objetivas para amostras coradas. O domínio destes controlos produz micrografias de campo claro prontas para publicação.

Aula 4 • Configuração da Iluminação de Köhler

Ensina o alinhamento passo a passo da iluminação de Köhler para uma iluminação uniforme e sem encandeamento. A iluminação correta é o pré-requisito para todas as imagens de campo claro de alta qualidade.

Aula 1 • Marcadores e Sondas Fluorescentes

Aborda corantes orgânicos, proteínas fluorescentes e pontos quânticos para marcação biológica. A escolha do marcador afeta a especificidade, o brilho e a compatibilidade com a imagiologia de células vivas.

Aula 2 • Conjuntos de Filtros e Configuração Ótica

Detalha filtros de excitação, espelhos dicróicos e filtros de emissão para isolamento de canais. A correspondência correta dos filtros maximiza o sinal e minimiza a sobreposição espetral.

Aula 3 • Imagiologia de Fluorescência Multicanal

Ensina a aquisição sequencial e simultânea de múltiplos canais de fluorescência. A análise de colocalização correta requer alinhamento preciso dos canais e calibração.

Aula 4 • Protocolos de Imunofluorescência

Aborda a marcação com anticorpos primários e secundários para amostras fixas. A otimização das concentrações de bloqueio e de anticorpos reduz o fundo e melhora a relação sinal-ruído.

Aula 1 • Microscopia de Excitação por Dois Fotões

Apresenta lasers pulsados de infravermelhos próximos para imagiologia de tecidos profundos com baixa fototoxicidade. A excitação por dois fotões confina a fluorescência ao plano focal, reduzindo o fotodano.

Aula 2 • Parâmetros de Aquisição Confocal

Aborda velocidade de varrimento, tempo de permanência do pixel, média e definições do passo z. Equilibrar a velocidade e a qualidade do sinal evita o fotobranqueamento, mantendo a resolução.

Aula 3 • Princípios da Microscopia Confocal

Explica o corte ótico baseado no pinhole e o varrimento pontual em sistemas confocais. O corte ótico elimina a desfocagem fora do plano para reconstruções 3D nítidas.

Aula 4 • Reconstrução e Visualização 3D

Ensina renderização de volume, renderização de superfície e projeção ortogonal a partir de pilhas z. A visualização 3D precisa comunica relações espaciais em amostras complexas.

Aula 1 • Visão Geral da Criomicroscopia Eletrónica

Aborda a preparação de amostras para criomicroscopia eletrónica (crio-EM), a recolha de dados e a análise de partículas isoladas. A crio-EM permite uma resolução quase atómica de complexos macromoleculares sem cristalização.

Aula 2 • Fundamentos da Microscopia Eletrónica de Transmissão

Aborda a operação do canhão de eletrões, o alinhamento das lentes e os sistemas de vácuo em TEM. Compreender a ótica eletrónica permite uma configuração correta e imagiologia de alta resolução.

Aula 3 • Preparação de Amostras para TEM

Detalha a coloração negativa, a preparação de grelhas para crio-TEM e o desbaste por feixe de iões focado. A qualidade da amostra é o principal determinante da resolução da imagem em TEM.

Aula 4 • Operação do Microscópio Eletrónico de Varrimento

Explica os parâmetros do feixe, os tipos de detetores e os requisitos de vácuo para SEM. A seleção correta dos parâmetros produz imagens de alta resolução da topografia da superfície.

Aula 1 • Calibração e Validação de Instrumentos

Aborda a calibração lateral e axial, a medição da PSF e os testes de reprodutibilidade da platina. A calibração regular garante que as medições são exatas e comparáveis entre sessões.

Aula 2 • Procedimentos de Manutenção Preventiva

Detalha a limpeza de lentes, as verificações de alinhamento e os calendários de monitorização da potência do laser. A manutenção preventiva prolonga a vida útil do instrumento e reduz o tempo de inatividade não planeado.

Aula 3 • Documentação e Procedimentos Operacionais Padrão

Ensina a redação de POPs, o registo de experiências e a rastreabilidade dos dados para conformidade regulamentar. A documentação exaustiva apoia a reprodutibilidade e a preparação para auditorias.

Aula 4 • Resolução de Problemas de Imagem

Fornece uma abordagem sistemática de árvore de decisão para diagnosticar má qualidade de imagem. A resolução de problemas estruturada reduz o tempo de resolução e evita problemas recorrentes.